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HTRF IKKB TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

总 IKK-β 检测可直接在完整细胞中检测总 IKK-β。该试剂盒采用简化流程，适用于小体积检测格式，可用于从基础研究到高通量药物筛选等多个领域。

工作原理

总 IKK-β 检测原理

总 IKK-β 检测用于定量细胞裂解物中 IKK-β 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 IKK-β 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 IKK-β 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式，便于评估蛋白质的表达水平。

总 IKK-β 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入总 IKK-β HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

总 IKK-β 细胞单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测细胞中总 IKK-β 可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

在 HeLa 细胞上检测磷酸化和总 IKK-β

将不同密度（200K 和 100K）的 HeLa 细胞以 100 µL 体系接种到 96 孔板中，过夜孵育。吸去培养基，加入 50 µL 不同浓度的 IL-1β，孵育 15 分钟。孵育后，吸去培养基，加入 50 µL 1X 裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 IKK-β（Ser177/181）或总 IKK-β 检测试剂。室温孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。

简化通路

IKK-β 简化通路

NF-κB 的激活始于信号诱导的 IκB 蛋白降解，这一过程主要通过激活一种名为 IκB 激酶（IKK）的激酶实现。IKK 由 3 个亚基组成异源三聚体，包括 IKK-α 和 IKK-β（两个催化亚基）以及 IKK-γ/NEMO（一个调节亚基）。激活的 IKK-β 可磷酸化一种称为 NF-κB 抑制剂的蛋白 IκB（IκBα）—— 该蛋白通过结合 NF-κB 来抑制其功能。磷酸化的 IκB 通过泛素化途径降解，释放 NF-κB，使其进入细胞核，激活各种参与炎症和其他免疫反应的基因。在中风后的脑细胞中，IKK-β 发挥着重要作用。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰类型：总蛋白（Total）
产品类别：试剂盒（Kit）
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：传染病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：63ADK097PEY

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