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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF IRAK3 TOTAL KIT - 50K PTS

概述

IRAK3 是 toll 样受体(TLR)和白细胞介素 - 1 受体(IL1R)的介质。IRAK3 与 MyD88 以及 IRAK2/4 结合,从而抑制 IRAK1 的磷酸化和激活。IRAK2 作为 TLR/ILR 通路的 “制动器”,在调节先天免疫方面发挥着明确作用。


这种基于细胞的检测方法可用于测量 IRAK3 蛋白水平的调节情况。

工作原理

总 IRAK3 检测原理

总 IRAK3 检测可对细胞裂解物中 IRAK3 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法(Western Blot)不同,该检测完全基于微孔板进行,无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 IRAK3 检测使用两种标记抗体:一种与供体荧光团偶联,另一种与受体荧光团偶联。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 IRAK3 时,添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近,从而产生 FRET(荧光共振能量转移)信号。该信号的强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比,并且提供了一种在无需洗涤的检测格式下评估蛋白质表达的方法。


总 IRAK3 双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞,然后进行裂解,接着将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中,之后再添加总 IRAK3 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。


总 IRAK3 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 IRAK3 可在单个平板中完成,该平板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选(HTS)设计的方案能够实现小型化,同时保持稳定的 HTRF 质量。


检测验证

THP - 1 细胞中 IRAK3 的内源性水平

将 THP - 1 细胞接种到 96 孔板中(每孔 50 µL),并在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 15 分钟。然后用 50 µL 2 倍浓度的补充裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中,并添加 4 µL HTRF 总 IRAK3 检测试剂。孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。


简化通路

IRAK3 及其作为 TLR/IL1R 信号负调节因子的作用

白细胞介素 - 1 受体相关激酶(IRAKs)是 toll 样受体(TLR)和白细胞介素 - 1 受体(IL1R)信号的介质。IRAK4、IRAK2 和 IRAK1 通过 TRAF6 传递信号,从而激活 NFκB 和 MAPK 通路,进而导致促炎细胞因子的转录。IRAK3 可抑制 TLR/IL1R 通路。它能阻止活性 IRAK(IRAK - 1 和 IRAK - 4)与 MyD88 解离,由此发挥先天 TLR 介导的免疫反应负调节因子的作用。


规格参数

其他规格


  • 应用:细胞信号传导
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 分子修饰:总蛋白
  • 产品类别:试剂盒
  • 样品体积:16 µL
  • 运输条件:干冰运输
  • 目标类别:磷蛋白
  • 目标物种:人
  • 技术:TR - FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
  • 治疗领域:炎症、肿瘤与炎症
  • 单位规格:50,000 个检测点


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货号:63ADK101PEY
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