IRAK3 是 toll 样受体(TLR)和白细胞介素 - 1 受体(IL1R)的介质。IRAK3 与 MyD88 以及 IRAK2/4 结合,从而抑制 IRAK1 的磷酸化和激活。IRAK2 作为 TLR/ILR 通路的 “制动器”,在调节先天免疫方面发挥着明确作用。
这种基于细胞的检测方法可用于测量 IRAK3 蛋白水平的调节情况。
总 IRAK3 检测可对细胞裂解物中 IRAK3 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法(Western Blot)不同,该检测完全基于微孔板进行,无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 IRAK3 检测使用两种标记抗体:一种与供体荧光团偶联,另一种与受体荧光团偶联。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 IRAK3 时,添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近,从而产生 FRET(荧光共振能量转移)信号。该信号的强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比,并且提供了一种在无需洗涤的检测格式下评估蛋白质表达的方法。
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞,然后进行裂解,接着将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中,之后再添加总 IRAK3 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。
使用 HTRF 试剂检测总 IRAK3 可在单个平板中完成,该平板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选(HTS)设计的方案能够实现小型化,同时保持稳定的 HTRF 质量。
将 THP - 1 细胞接种到 96 孔板中(每孔 50 µL),并在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 15 分钟。然后用 50 µL 2 倍浓度的补充裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移到 384 孔小体积白色微孔板中,并添加 4 µL HTRF 总 IRAK3 检测试剂。孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。
白细胞介素 - 1 受体相关激酶(IRAKs)是 toll 样受体(TLR)和白细胞介素 - 1 受体(IL1R)信号的介质。IRAK4、IRAK2 和 IRAK1 通过 TRAF6 传递信号,从而激活 NFκB 和 MAPK 通路,进而导致促炎细胞因子的转录。IRAK3 可抑制 TLR/IL1R 通路。它能阻止活性 IRAK(IRAK - 1 和 IRAK - 4)与 MyD88 解离,由此发挥先天 TLR 介导的免疫反应负调节因子的作用。
其他规格
- 应用:细胞信号传导
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF
- 分子修饰:总蛋白
- 产品类别:试剂盒
- 样品体积:16 µL
- 运输条件:干冰运输
- 目标类别:磷蛋白
- 目标物种:人
- 技术:TR - FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
- 治疗领域:炎症、肿瘤与炎症
- 单位规格:50,000 个检测点