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HTRF IRAK4 TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

IRAK4（白细胞介素 - 1 受体相关激酶 4）是一种丝氨酸 - 苏氨酸激酶，在与 Toll 样受体相关的信号级联反应中至关重要。IRAK4 通过 NF-κB 介导的和有丝分裂原激活蛋白激酶（MAPK）的激活参与促炎细胞因子的产生，并通过干扰素反应因子 3 和 7（IRF3/7）参与 IFNα/β 的分泌。

这种基于细胞的检测方法可测量 IRAK4 蛋白水平的调节情况。

工作原理

总 IRAK4 检测原理

该总 IRAK4 检测可对细胞裂解物中 IRAK4 的表达水平进行定量。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 IRAK4 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 IRAK4 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式，为评估蛋白质表达提供了便利。

总 IRAK4 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入总 IRAK4 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

总 IRAK4 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 IRAK4 可在单个微孔板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

THP-1 细胞中 IRAK4 的内源性水平

将 THP-1 细胞接种到 96 孔板中（每孔 50 µL），在 37°C、5% CO₂ 条件下孵育 15 分钟。然后用 50 µL 2 倍浓度的补充裂解缓冲液 #1 在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 总 IRAK4 检测试剂。孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。

简化通路

IRAK4 是 TLR/IL1R 信号的主要调节因子

IRAK4 是一种蛋白激酶，属于白细胞介素 - 1 受体相关激酶（IRAKs）家族，在识别病原体相关分子模式（PAMPs）后，参与由 Toll / 白细胞介素 - 1 受体超家族传导的信号通路。与 IRAK2 和 IRAK1 一样，IRAK4 通过 TRAF6 传递信号，导致 NFκB 和 MAPK 通路激活，进而促进促炎细胞因子的转录。与其他 IRAK 蛋白不同，抑制 IRAK4 的活性会完全阻断 TLR 受体信号，使其成为 IL-1/TLR 信号通路中的关键组成部分。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：炎症、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：63ADK108PEY

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