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HTRF BAD P-S112 KIT - 50K PTS

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概述

Phospho-Bad（Ser112）细胞检测试剂盒旨在高效、便捷地定量细胞裂解物中的磷酸化 BAD 蛋白。该检测无需洗涤步骤，操作快速简便，结果灵敏度高，可应用于药物研发的各个环节，从基础研究到高通量筛选均可适用。

检测原理

Phospho-BAD（Ser112）检测原理

Phospho-BAD（Ser112）检测用于测量在 Ser112 位点发生磷酸化的 BAD 蛋白。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则可识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

Phospho-BAD（Ser112）双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入 Phospho-BAD（Ser112）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

（HTRF 总 BRD2 检测的双板方案示意图）

Phospho-BAD（Ser112）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 BAD（Ser112）可在同一板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。此方案专为高通量筛选（HTS）设计，能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

（HTRF 总 BRD2 检测的单板方案示意图）

检测验证

Phospho-BAD（Ser112）试剂盒的 WB 与 HTRF 检测对比

Cos-7 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 1 天。第 2 天：移除细胞培养基后，加入 3mL 补充的裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取等量裂解物，对蛋白质印迹法（Western Blot）和 HTRF 检测进行平行对比。使用 HTRF Phospho-Bad（Ser112）检测可检测到 220 个细胞，而蛋白质印迹法则需要 1750 个细胞。HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 4 倍。

Phospho-BAD（Ser112）试剂盒对 HEK293 细胞的 PMA 剂量反应

人 HEK293 细胞（100,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的 PMA 刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案测量磷酸化 Bad 蛋白的水平。

星形孢菌素对受刺激的 MCF7 和 Cos-7 细胞的抑制作用

人 MCF7 细胞和猴 Cos-7 细胞（25,000 个细胞 / 孔）与不同浓度的星形孢菌素抑制剂在 37°C 下孵育 3 小时。然后加入 0.8µM 的 PMA 刺激细胞，样品继续孵育 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板方案通过 HTRF Phospho-Bad（Ser112）检测测量 Bad 蛋白磷酸化的抑制情况。

简化通路

促凋亡因子 Bad 信号的简化通路

Bad 是 Bcl-2 蛋白家族中的一种促凋亡因子，通过调节细胞色素 C 的释放来控制线粒体膜的通透性。在健康的增殖细胞中，Bad 发生磷酸化并被隔离在细胞质中；而在应激细胞中，死亡信号会诱导 Bad 去磷酸化，并使其转移到线粒体膜上，通过与 Bcl-Xl 或 Bcl-2 异源二聚化来中和它们的作用，从而诱导细胞色素 C 释放，最终导致细胞凋亡。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64BADPEY

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