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HTRF (H) CGAS TOTAL KIT - 500 PTS

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品牌： Revvity

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概述


在病原体感染以及双链 DNA 与细胞质传感器 cGAS 结合后，STING 蛋白会被 TBK1 磷酸化，使其能够与 IRF3 结合，进而诱导 1 型干扰素的产生。随后，STING 通路会通过自噬相关的 STING 降解过程被关闭。


在免疫肿瘤学领域，激活 STING 通路在临床前模型中已显示出良好的抗肿瘤效果，因此这成为一种治疗人类癌症的潜在治疗策略。


工作原理

总 cGAS 检测原理

总 cGAS 检测用于定量细胞裂解物中 cGAS 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 cGAS 检测使用两种标记抗体，一种与供体荧光团偶联，另一种与受体荧光团偶联。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 cGAS 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中该蛋白的浓度直接成正比，并在免洗涤的检测形式下为评估蛋白的表达水平提供了方法。


human-total-cGAS-detection-kit（人总 cGAS 检测试剂盒）

总 cGAS 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至小体积检测板（HTRF 384 孔小体积板或 96 孔小体积板）中，再加入 HTRF 总 cGAS 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。


human-total-cGAS-detection-kit（人总 cGAS 检测试剂盒）

总 ATG16L1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 cGAS 可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。


human-total-cGAS-detection-kit（人总 cGAS 检测试剂盒）


检测验证

在经 siRNA 处理的 THP-1 细胞中验证总 cGAS 的检测

将 THP-1 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，每孔加入 90µl 完全培养基。对于经脂质体处理的样品，加入 10µl 含 1% 脂质体的培养基。对于经 siRNA 处理的细胞，加入 10µl 脂质体 RNAiMax 与 cGAS 的 siRNA 混合物。然后将细胞在 37°C、5% CO₂条件下孵育 48 小时和 72 小时。


孵育后，用 33.3µL 4X 补充的 1 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞，将 16µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，然后加入 2µL HTRF d2 检测试剂和 2µL HTRF Eu-K 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。


human-total-cGAS-detection-kit（人总 cGAS 检测试剂盒）

在经 siRNA 处理的 HeLa 细胞中验证总 cGAS 的检测

将 HeLa 细胞以每孔 50,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，每孔加入 90µl 完全培养基。对于经脂质体处理的样品，加入 10µl 含 1% 脂质体的培养基。对于经 siRNA 处理的细胞，加入 10µl 脂质体 RNAiMax 与 cGAS 的 siRNA 混合物。然后将细胞在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时和 48 小时。


孵育后，用 90µL 1X 补充的 1 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞，将 16µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，然后加入 2µL HTRF d2 检测试剂和 2µL HTRF Eu-K 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。


human-total-cGAS-detection-kit（人总 cGAS 检测试剂盒）


规格


其他规格

  • 应用：细胞信号传导
  • 品牌：HTRF
  • 检测方式：HTRF
  • 兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液
  • 分子修饰：总量
  • 产品类别：试剂盒
  • 样品体积：16µL
  • 运输条件：干冰运输
  • 靶标类别：磷蛋白
  • 靶标物种：人
  • 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
  • 单位规格：500 个检测点


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货号：64CGASTPEG
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