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HTRF CRAF TOTAL KIT - 500 PTS 总C-Raf原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶检测试剂盒

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品牌： Revvity

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概述

总 cRaf 细胞检测试剂盒旨在通过简化的混合即读、无需洗涤流程，对总 cRaf 进行可靠定量。cRaf 在细胞增殖和分化中起着关键作用。该试剂盒可用于从基础研究到高通量药物筛选等多个领域。其多功能性使其适用于多种应用场景，涵盖基础研究、细胞模型中的药理学问题分析，以及肿瘤学和传染病研究等领域。

工作原理

总 cRaf 检测原理

总 cRaf 检测可对细胞裂解物中 cRaf 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 cRaf 检测使用两种标记抗体，一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在内皮型一氧化氮合酶（eNOS）时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中该蛋白的浓度直接相关，且无需洗涤步骤即可评估蛋白的表达水平。

total-cRaf-cellular-kit（总 cRaf 细胞试剂盒）

总 cRaf 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入 HTRF 总 cRaf 检测试剂。该方案可监测细胞活力和汇合度。

total-cRaf-cellular-kit（总 cRaf 细胞试剂盒）

总 cRaf 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总内皮型一氧化氮合酶（eNOS）可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

total-cRaf-cellular-kit（总 cRaf 细胞试剂盒）

检测验证

在 TPA 刺激的 HeLa 细胞中检测总 c-RAF 和磷酸化 c-RAF（S43）

将 HeLa 细胞以 100 µl 的量接种到 96 孔板中（100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。次日，移除培养基，加入 50 µl 无血清培养基，在 37°C、5% CO₂条件下使细胞饥饿 5 小时。然后，用 50 µl 不同浓度的佛波酯（TPA）在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 15 分钟。

移除培养基后，用 50 µL 补充的 2 号裂解缓冲液在室温下轻柔振荡 30 分钟以裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 µL 预混合的 HTRF 磷酸化 cRaf（Ser43）或总 cRaf 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

total-cRaf-cellular-kit（总 cRaf 细胞试剂盒）

在 TPA 刺激的 HEK293T 细胞中检测总 c-RAF 和磷酸化 c-RAF（S43）

将 HEK293T 细胞以 100 µl 的量接种到 96 孔板中（100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。次日，移除培养基，加入 50 µl 无血清培养基，在 37°C、5% CO₂条件下使细胞饥饿 5 小时。然后，用 50 µl 不同浓度的佛波酯（TPA）在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 15 分钟。

移除培养基后，用 50 µL 补充的 2 号裂解缓冲液在室温下轻柔振荡 30 分钟以裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 µL 预混合的 HTRF 磷酸化 cRaf（Ser43）或总 cRaf 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

total-cRaf-cellular-kit（总 cRaf 细胞试剂盒）

简化通路

RSK1 的功能与调节

RAF 原癌基因丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶（c-RAF）是丝裂原活化蛋白（MAP）激酶通路的一部分，它将上游效应因子 Ras 与下游的 MAPK/ERK 级联反应连接起来。因此，它在细胞命运决定中发挥作用，包括增殖、分化、凋亡、存活和致癌转化。

c-RAF 可通过蛋白激酶 C（PKC）的直接或间接作用使 Ser338 磷酸化而被激活，也可被 GTP 结合的 Ras 直接激活。通过 MAPK/ERK 依赖性反馈使 Ser43 磷酸化可确保其失活。

total-cRaf-cellular-kit（总 cRaf 细胞试剂盒）

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
自动化兼容性：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总量
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管、代谢 / 糖尿病、肿瘤学与炎症
单位规格：500 个检测点

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货号：64CRAFTPEG

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