当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF (H/M) CYCLIN D1 TOTAL KIT - 500 PTS 人源鼠源总周期蛋白依赖性激酶D1 HTRF检测试剂盒

/

HTRF (H/M) CYCLIN D1 TOTAL KIT - 500 PTS 人源鼠源总周期蛋白依赖性激酶D1 HTRF检测试剂盒

分享给好友

下载产品资料

rvty_ls_manual_64CYCD1TPEG-64CYCD1TPEH

rvty_ls_sds_64CYCD1TPEG_US rvty_ls_sds_64CYCD1TPEG_SPA rvty_ls_sds_64CYCD1TPEG_UK rvty_ls_sds_64CYCD1TPEG_ITA rvty_ls_sds_64CYCD1TPEG_ELL rvty_ls_sds_64CYCD1TPEG_DEU rvty_ls_sds_64CYCD1TPEG_FRA

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

总细胞周期蛋白 D1（Total Cyclin D1）细胞检测试剂盒可便捷、准确地检测细胞内总细胞周期蛋白 D1 的水平。该试剂盒与磷酸化细胞周期蛋白 D1（Thr286）试剂盒的缓冲液兼容，因此同一份裂解物可用于分析磷酸化蛋白和总蛋白群体。

细胞周期蛋白 D 家族成员（包括细胞周期蛋白 D1、细胞周期蛋白 D2 和细胞周期蛋白 D3）是细胞周期进程的重要调控因子。它们作为 CDK4/6 的变构调节因子，是生长因子依赖性 G1 期向 S 期转换的关键介导者。

在细胞外有丝分裂原刺激下，细胞周期蛋白 D1 会被上调，随后在激酶 GSK-3β 的作用下于 Thr286 位点发生磷酸化，并通过蛋白酶体降解迅速下调。

细胞周期蛋白 D1 是一种癌基因，在许多人类癌症中存在过表达。细胞周期蛋白 D1 水平的异常升高会导致 CDK4/6 活性失调，进而引发肿瘤发生。细胞周期蛋白 D1 过表达可能由基因扩增、染色体重排或蛋白质降解受损引起。

工作原理

总细胞周期蛋白 D1 检测原理

总细胞周期蛋白 D1 检测可对细胞裂解物中细胞周期蛋白 D1 的表达水平进行定量。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总细胞周期蛋白 D1 检测使用两种标记抗体，一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白质上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在细胞周期蛋白 D1 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中该蛋白质的浓度直接成正比，并在免洗涤的检测形式下为评估蛋白质的表达水平提供了方法。

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

总细胞周期蛋白 D1 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至小体积检测板，再加入总细胞周期蛋白 D1 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

总细胞周期蛋白 D1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总细胞周期蛋白 D1 可在单个用于培养、处理和裂解的培养板中完成，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

检测验证

通过 siRNA 敲低实验验证总细胞周期蛋白 D1 检测的特异性

将 MCF7 细胞接种到 96 孔板中（50,000 个细胞 / 孔），培养 24 小时。然后用分别靶向细胞周期蛋白 D1、细胞周期蛋白 D2 或细胞周期蛋白 D3 的 siRNA 转染细胞，同时使用非靶向 siRNA 作为阴性对照。用 siRNA 孵育 24 小时后，更换培养基再孵育 24 小时，随后用 10 µM MG132 处理细胞 4 小时。细胞裂解后，将 16 µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 总细胞周期蛋白 D1 检测抗体以检测总细胞周期蛋白 D1。同时，将 4 µL 相同裂解物转移至检测板的单独孔中，使用 HTRF GAPDH 内参检测试剂盒（货号 64GAPDHPEG、64GAPDHPEH）检测 GAPDH。两种检测均在过夜孵育后记录 HTRF 信号。

与转染非靶向 siRNA 的细胞相比，转染靶向细胞周期蛋白 D1 的 siRNA 的细胞在总细胞周期蛋白 D1 检测中的信号降低了 78%。相反，敲低细胞周期蛋白 D2 和细胞周期蛋白 D3 并未导致信号降低。此外，内参蛋白 GAPDH 的水平未受 siRNA 处理的显著影响，这表明在细胞周期蛋白 D1 siRNA 存在时，总细胞周期蛋白 D1 检测中观察到的信号降低并非由细胞毒性引起。综上，这些数据表明 HTRF 总细胞周期蛋白 D1 检测对细胞周期蛋白 D1 具有特异性，且不会与其他细胞周期蛋白 D 家族成员发生交叉反应。

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

在 MG132 存在下抑制细胞周期蛋白 D1 的蛋白酶体降解

将不同密度的人纤维肉瘤细胞系 HT-1080 接种到 96 孔培养处理板中，加入完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下培养过夜。用 10 µM MG132 处理细胞 4 小时（或不处理），然后用 50 µL 补充的 1 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。检测时，将 16 µL 细胞裂解物转移至小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化细胞周期蛋白 D1（Thr186）或总细胞周期蛋白 D1 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

如预期所示，在蛋白酶体抑制剂 MG132 存在时，磷酸化细胞周期蛋白 D1（Thr286）和总细胞周期蛋白 D1 的水平均升高，这是因为 MG132 阻断了蛋白质的泛素依赖性蛋白酶体降解，导致其在细胞内积累。

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

依维莫司处理的乳腺癌细胞中细胞周期蛋白 D1 降解的诱导

将人乳腺癌细胞系 MCF7 以每孔 100,000 个细胞的密度接种到含完全培养基的 96 孔培养处理板中，在 37°C、5% CO₂条件下培养过夜。用不同浓度的依维莫司处理细胞，再孵育过夜，然后用 50 µL 补充的 1 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。检测时，将 16 µL 细胞裂解物转移至小体积白色微孔板中，并加入 4 µL 总细胞周期蛋白 D1 检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

用 mTORC1 抑制剂依维莫司处理细胞后，细胞中细胞周期蛋白 D1 的含量因降解而呈剂量依赖性降低。这些结果与文献报道一致（Chen 等人，《美国生理学杂志 - 细胞生理学》317: C244–C252, 2019）。

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

HTRF 总细胞周期蛋白 D1 检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将 MCF7 细胞在 T175 培养瓶中用完全培养基在 37°C、5% CO₂条件下培养。孵育 48 小时后，用 10 µM MG132 处理细胞 4 小时，然后用 3 mL 补充的 1 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟裂解细胞。

用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 各稀释液转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 µL HTRF 总细胞周期蛋白 D1 检测试剂。取等量裂解物进行 HTRF 和蛋白质印迹法的平行比较。

使用 HTRF 总细胞周期蛋白 D1 检测时，仅需 400 个细胞 / 孔就能检测到显著信号，而使用蛋白质印迹法则需要 12,500 个细胞才能获得最低化学发光信号。因此，在该条件下，HTRF 总细胞周期蛋白 D1 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 32 倍。

human-mouse-total-cyclin-d1-detection-kit

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
兼容自动化操作：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
分子修饰：总量
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：500 个检测点

没有数据

没有数据

货号：64CYCD1TPEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

1盒/500测试￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价

相关靶点蛋白推荐

上海普纳生物技术有限公司