当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF FGFR4 TOTAL KIT - 10K PTS

HTRF FGFR4 TOTAL KIT - 10K PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64FGFR4TPEH_US rvty_ls_sds_64FGFR4TPEH_SPA rvty_ls_sds_64FGFR4TPEH_ITA rvty_ls_sds_64FGFR4TPEH_UK rvty_ls_sds_64FGFR4TPEH_ELL rvty_ls_sds_64FGFR4TPEH_DEU rvty_ls_sds_64FGFR4TPEH_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

总 FGFR4 细胞检测可监测总 FGFR4 的水平，并与磷酸化 FGFR4 试剂盒配合使用，作为归一化检测。

工作原理

总 FGFR4 检测原理

总 FGFR4 检测用于定量细胞裂解物中 FGFR4 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 FGFR4 检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 FGFR4 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中目标蛋白的浓度直接成正比，且可在无需洗涤的检测形式下评估蛋白的表达情况。

total-fgfr4-cellular-kit

总 FGFR4 双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入总 FGFR4 HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞的活力和汇合度。

total-fgfr4-cellular-kit

总 FGFR4 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 FGFR4 可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中完成，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

total-fgfr4-cellular-kit

检测验证

多种人类癌细胞系中 FGFR 蛋白水平的评估

将不同的人类癌细胞系接种到 T175 培养瓶中，在 37°C、5% CO₂条件下用完全培养基培养。随后，用 3 mL 补充裂解缓冲液 #4（1X）在室温下轻轻摇晃 30 分钟裂解细胞。

对每个细胞系 25 µg 的总蛋白以及 KG-1 细胞系 15 µg 的总蛋白进行总 FGFR1-2-3 和 - 4 蛋白水平分析。将 16 µL 归一化样品转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL 各 HTRF 总 FGFR1、FGFR2、FGFR3 或 FGFR4 检测抗体。孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果显示四种不同 FGFR 受体的表达模式存在差异：FGFR1 在 DMS114 肺癌细胞模型和 KG-1 骨髓性白血病模型中高表达；FGFR2 在 SNU-16 和 Kato-III 胃癌模型中优先表达；FGFR3 在 KMS-11 多发性骨髓瘤细胞系中表达；FGFR4 在乳腺癌模型或 HuH7 肝癌细胞系中表达。此外，这些结果证实了 HTRF 总 FGFR 试剂盒的识别特异性。

total-fgfr4-cellular-kit

在乳腺癌细胞上对 FGFR4 试剂盒的验证

将人类乳腺癌细胞接种到 96 孔板中（200,000 个细胞 / 孔），过夜孵育。用浓度递增的 AZD4547 处理细胞 6 小时（37°C、0% CO₂）。处理后，用 50 µL 补充裂解缓冲液 #4（1X）在室温下轻轻摇晃 30 分钟裂解细胞。细胞裂解后，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 FGFR4（Tyr642）或总 FGFR4 检测试剂。室温下过夜孵育后记录 HTRF 信号。

正如预期，结果显示经 AZD4547 处理后，FGFR4 的 Y642 磷酸化受到剂量依赖性抑制，而 FGFR4 的表达水平保持恒定。

total-fgfr4-cellular-kit

HTRF 总 FGFR4 检测与蛋白质印迹法的比较

将乳腺癌细胞在 T175 培养瓶的完全培养基中于 37°C、0% CO₂条件下培养。孵育 72 小时后，用 3 mL 补充裂解缓冲液 #4（1X）在室温下轻轻摇晃 30 分钟裂解细胞。

用补充裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 各稀释液转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 µL HTRF 总 FGFR4 检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。

蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较表明，至少在这些实验条件下，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。

total-fgfr4-cellular-kit

简化通路

FGFR 信号传导简化通路

FGFRs 是酪氨酸激酶受体，通过与 FGF 配体结合而激活。这种结合会促使受体同源二聚化，进而激活 FGFR 的酪氨酸激酶结构域，并使特定酪氨酸残基磷酸化。激活的受体成为多种蛋白质的停靠位点，这些蛋白质可诱导多个信号转导级联反应的下游激活，包括 RAS-MAPK、PI3K-AKT、PLCγ 和 STAT 通路。

FRS2α 是与 FGFRs 持续结合的关键衔接蛋白。激活的 FGFR 会磷酸化 FRS2，从而招募 GRB2 和 SOS，以激活 RAS 及下游的 RAF 和 MAPK 通路（尤其是 ERK1/2）。GRB2 还可通过 GAB1 激活 PI3K，进而使 AKT 磷酸化。不依赖于 FRS2，PLCγ 与激活的 FGFR 胞内部分结合，通过水解 PIP2 产生 IP3 和 DAG。DAG 激活 PKC 酶，这在一定程度上会增强 MAPK 通路的激活。根据细胞环境的不同，FGFRs 还会激活其他通路，如 STAT 信号通路。

从 FGFRs 传递至细胞核的信号会调控多种生物学功能，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。多种癌症中 FGFRs 的异常与 FGFRs 的过表达或过度活跃相关，这使得这些受体成为抗癌治疗的关键靶点。

total-fgfr4-cellular-kit

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

没有数据

货号：64FGFR4TPEH

一键复制

参考价格 ¥ 172916.60

产品规格

请咨询￥172916.60

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价