当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF FGFR4 P-Y642 KIT - 500 PTS

HTRF FGFR4 P-Y642 KIT - 500 PTS

分享给好友

rvty_ls_manual_64FGFR4Y6PEG-64FGFR4Y6PEH

rvty_ls_sds_64FGFR4Y6PEG_US rvty_ls_sds_64FGFR4Y6PEG_ITA rvty_ls_sds_64FGFR4Y6PEG_UK rvty_ls_sds_64FGFR4Y6PEG_SPA rvty_ls_sds_64FGFR4Y6PEG_DEU rvty_ls_sds_64FGFR4Y6PEG_ELL rvty_ls_sds_64FGFR4Y6PEG_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

磷酸化 FGFR4 检测试剂盒旨在对 FGFR4 的调控进行稳健定量，具体针对酪氨酸 642（Tyr642）位点的磷酸化情况，可作为 MAPK 和 PI3K/AKT 通路的读数指标。

检测原理

磷酸化 FGFR4（Tyr642）检测原理

磷酸化 FGFR4（Tyr642）检测试剂盒用于检测在 Tyr642 位点发生磷酸化的 FGFR4。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了便利。

phospho-fgfr4-cellular kit

磷酸化 FGFR4（Tyr642）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解液转移至 384 孔低体积检测板中，之后添加磷酸化 FGFR4（Tyr642）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

phospho-fgfr4-cellular kit

磷酸化 FGFR4（Tyr642）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 FGFR4（Tyr642）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

phospho-fgfr4-cellular kit

检测验证

多种人类癌细胞系中 FGFR 蛋白水平的评估

将不同的人类癌细胞系接种到 T175 培养瓶中，在完全培养基中于 37°C、5% CO₂条件下培养。然后用 3 mL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 裂解细胞，在室温下轻轻振荡 30 分钟。

对每种细胞系的 25μg 总蛋白以及 KG-1 细胞系的 15μg 总蛋白进行总 FGFR1-2-3 和 FGFR4 蛋白水平分析。将 16μL 标准化后的样品转移至 384 孔低体积白色微孔板中，并加入 4μL 各 HTRF 总 FGFR1、FGFR2、FGFR3 或 FGFR4 检测抗体。孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果显示四种不同 FGFR 受体的表达模式存在差异。其中，FGFR1 在 DMS114 肺癌细胞模型和 KG-1 骨髓性白血病模型中高表达；FGFR2 在 SNU-16 和 Kato-III 胃癌模型中优先表达；FGFR3 在 KMS-11 多发性骨髓瘤细胞系中表达；FGFR4 则在乳腺癌模型或 HuH7 肝癌细胞系中表达。

phospho-fgfr4-cellular kit

FGFR4 试剂盒在乳腺癌细胞中的验证

将人类乳腺癌细胞接种到 96 孔板中（每孔 200,000 个细胞），孵育过夜。用不同浓度的 AZD4547 处理细胞，在 37°C、0% CO₂条件下培养 6 小时。处理后，用 50μL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 裂解细胞，在室温下轻轻振荡 30 分钟。细胞裂解后，将 16μL 裂解液转移至 384 孔低体积白色微孔板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 FGFR4（Tyr642）或总 FGFR4 检测试剂。在室温下孵育过夜后记录 HTRF 信号。

正如预期，结果显示经 AZD4547 处理后，FGFR4 的 Y642 磷酸化水平呈剂量依赖性抑制，而 FGFR4 的表达水平保持稳定。

phospho-fgfr4-cellular kit

HTRF 磷酸化 FGFR4（Tyr642）检测与蛋白质印迹法的比较

乳腺癌细胞在 T175 培养瓶中的完全培养基中培养，条件为 37°C、0% CO₂。孵育 72 小时后，用 3 mL 补充的 1X 裂解缓冲液 #4 裂解细胞，在室温下轻轻振荡 30 分钟。

使用补充的裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，将 16μL 各稀释液转移至低体积白色微孔板中，然后加入 4μL HTRF 磷酸化 FGFR4（Tyr642）检测试剂。取等量裂解液用于 HTRF 检测与蛋白质印迹法的平行比较。

平行比较结果表明，在该实验条件下，HTRF 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 16 倍。

phospho-fgfr4-cellular kit

简化通路

FGFR 信号传导简化通路

FGFRs 是酪氨酸激酶受体，通过与 FGF 配体结合而激活。这种结合会驱动受体同源二聚化，进而激活 FGFR 的酪氨酸激酶结构域，并使特定的酪氨酸残基发生磷酸化。激活的受体可作为多种蛋白质的停靠位点，这些蛋白质会诱导下游多个信号转导通路的激活，包括 RAS-MAPK、PI3K-AKT、PLCγ 和 STAT 通路。

FRS2α 是与 FGFRs 持续结合的关键衔接蛋白。激活的 FGFR 会磷酸化 FRS2，从而招募 GRB2 和 SOS，以激活 RAS 及下游的 RAF 和 MAPK 通路，尤其是 ERK1/2。GRB2 还可通过 GAB1 激活 PI3K，进而磷酸化 AKT。独立于 FRS2，PLCγ 与激活的 FGFRs 胞内部分结合，通过水解 PIP2 产生 IP3 和 DAG。DAG 激活 PKC 酶，这在一定程度上会增强 MAPK 通路的激活。根据细胞环境的不同，FGFRs 还会激活其他通路，如 STAT 信号通路。

从 FGFRs 传递至细胞核的信号会调控多种生物学功能，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。在多种癌症中，FGFRs 的异常与 FGFRs 的过表达或过度激活相关，这使得该受体成为抗癌治疗的关键靶点。

phospho-fgfr4-cellular kit

规格

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16μL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人类
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：500 次检测点数

没有数据

货号：64FGFR4Y6PEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

请咨询￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价