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HTRF FOXO1 P-S256 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 FoxO1（Ser256）检测旨在对 FoxO1 的调控进行可靠定量，具体针对 Ser256 位点的磷酸化，以此作为其失活的指标。FoxO1 是叉头框转录因子 FOXO 亚家族的成员，在胰岛素敏感组织中高表达，调控糖 / 脂代谢和应激抵抗。它还通过抑制细胞增殖发挥肿瘤抑制因子的作用。FoxO1 的失调在糖尿病和非酒精性脂肪肝（NAFLD）等代谢疾病的发展中起关键作用，其功能异常还与多种癌症相关。

工作原理

磷酸化 FoxO1（Ser251）检测原理

磷酸化 FoxO1（Ser251）检测用于测量在 Ser251 位点发生磷酸化的 FoxO1。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的形式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了手段。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

磷酸化 FoxO1（Ser251）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后再加入磷酸化 FoxO1（Ser251）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

磷酸化 FoxO1（Ser251）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 FoxO1（Ser251）可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持可靠的 HTRF 质量。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

检测验证

胰岛素处理后 FoxO1 的失活

将人 HepG2 细胞和小鼠 C2C12 细胞接种并在高糖培养基中培养，随后用不同浓度的胰岛素处理 1 小时。裂解后，将细胞裂解物两次转移至小体积白色微孔板中，最后加入 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。在两种细胞系中，胰岛素处理均诱导 FoxO1 在 Ser256 位点发生磷酸化（失活），而其表达水平保持稳定。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

细胞因子和氧化应激对 HepG2 细胞中 FoxO1 的激活

将人 HepG2 细胞接种并在高糖培养基中培养，然后用 TNF-α/IL-1β/IL-6 混合物或 H₂O₂处理。裂解后，将可溶性细胞裂解物两次转移至小体积白色微孔板中，最后加入 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。结果表明，促炎细胞因子和活性氧（ROS）通过诱导 HepG2 细胞系中 FoxO1 的去磷酸化（激活）来驱动代谢失调，而其表达水平保持稳定。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

使用 PI3K 抑制剂渥曼青霉素（Wortmannin）在胰腺 β 细胞中激活 FoxO1

将小鼠胰腺 β 细胞系 Min-6 接种并在高糖培养基中培养 3 天，随后用不同浓度的渥曼青霉素处理 1 小时。裂解后，将细胞裂解物两次转移至小体积白色微孔板中，最后加入 HTRF 磷酸化 FoxO1 或总 FoxO1 检测抗体。结果显示，渥曼青霉素诱导 PI3K/AKT 通路抑制，导致 Min-6 细胞系中 FoxO1 去磷酸化（激活）。FoxO1 表达水平保持稳定，表明该化合物对细胞无细胞毒性作用。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

在宫颈癌细胞系 HeLa 中使用 IGF-1 失活 FoxO1

将人 HeLa 细胞接种并在完全培养基中培养，孵育 24 小时。然后在无血清培养基中孵育过夜，再用不同浓度的 IGF-1 处理。裂解后，将细胞裂解物两次转移至小体积白色微孔板中，然后加入磷酸化或总 FoxO1 抗体。结果显示，生长因子 IGF-1 通过 Ser256 位点的磷酸化诱导 FoxO1 失活，从而促进肿瘤细胞增殖，且其表达水平保持稳定。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

人 HEK293 细胞中 HTRF 磷酸化及总 FoxO1 检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将 HEK293 细胞接种并在完全培养基中培养至 90% 汇合。裂解后，通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，转移至小体积白色微孔板中，然后加入 HTRF 磷酸化或总检测抗体。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较。结果显示，HTRF 磷酸化检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 2 倍；使用 HTRF 总 FoxO1 试剂盒时，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

简化通路

FoxO1 简化通路

胰岛素 / IGF-1 信号通路激活 AKT 激酶，进而使 FoxO1 在 Ser256 位点磷酸化，导致其在细胞质中滞留并抑制其转录活性。在这种情况下，肝糖生成受抑制，脂肪生成增加，细胞增殖。相反，去磷酸化形式的 FoxO1 可转运至细胞核，诱导参与糖生成、脂解、抑制脂肪生成、应激抵抗、凋亡、自噬和炎症的基因转录。应激蛋白 JNK 和 p38 在促炎细胞因子、氧化应激、禁食和运动条件下激活 FoxO1。

磷酸化 FoxO1 细胞检测试剂盒

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白质
目标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64FOXPEY

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