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HTRF HISTONE H3 P-S10 KIT - 10K PTS 磷酸化组蛋白H3(S10)检测试剂盒-10，000测试

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品牌： Revvity

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概述

磷酸化组蛋白 H3（Ser10）检测可实现对组蛋白 H3 尾部 Ser10 位点磷酸化的检测，组蛋白 H3 是基因表达和有丝分裂的关键调控因子。Ser10 位点的磷酸化与有丝分裂和减数分裂过程中的染色体凝缩密切相关。

工作原理

磷酸化组蛋白 H3（Ser10）检测原理

磷酸化组蛋白 H3（Ser10）检测用于测定丝氨酸 10（Ser10）位点磷酸化的组蛋白 H3。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化组蛋白 H3（Ser10）检测使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质的磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

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磷酸化组蛋白 H3（Ser10）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化组蛋白 H3（Ser10）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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磷酸化组蛋白 H3（Ser10）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化组蛋白 H3（Ser10）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

HTRF 磷酸化组蛋白 H3（Ser10）检测与蛋白质印迹法的比较

将指数生长期的 HeLa 细胞培养至 80% 汇合度，并用诺考达唑处理 16 小时。移除培养基并裂解细胞后，通过离心收集可溶性上清液。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法（WB）与 HTRF 的平行比较。HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 25 倍。使用 HTRF 磷酸化组蛋白 H3（Ser10）检测时，仅需 256 个细胞即可实现最小信号检测，而蛋白质印迹法则需要 6,400 个细胞才能产生信号。

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磷酸化组蛋白 H3（Ser10）作为细胞增殖的有丝分裂生物标志物

将 HeLa 和 A431 细胞接种到 96 孔板中，用诺考达唑（一种抗有丝分裂剂，可解聚微管并将细胞阻滞在有丝分裂期，此时组蛋白 H3 Ser10 位点磷酸化水平最高）处理 16 小时。移除细胞培养基后，加入 50 µL、100 µL 或 200 µL 裂解缓冲液，孵育 30 分钟。将 16 µL 各裂解物转移至 384 孔小体积白色板中进行 HTRF 分析。将裂解体积增加至 200 µL 可改善 HTRF 检测信号的线性度。

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磷酸化组蛋白 H3（Ser10）作为 Aurora 激酶 B 抑制的读出指标

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简化通路

细胞周期中的磷酸化组蛋白 H3-Ser10

组蛋白的整体磷酸化水平在细胞周期中波动显著，其特征是有丝分裂期组蛋白 H3 的 Ser10 位点磷酸化出现峰值。Aurora 激酶 B 直接负责有丝分裂期组蛋白 H3 Ser10 位点的磷酸化。Aurora 激酶 A 与 BORA 形成复合物，在 G2 期负责 PLK1 的初始激活，进而在 G2/M 转换检查点激活细胞周期蛋白依赖性激酶 1，推动细胞进入有丝分裂。Aurora 激酶 A 在人类癌症中常发生扩增，且其在人类肿瘤中的过表达与不良预后和基因组不稳定性相关。此外，Aurora 激酶 B 的高表达水平与胶质母细胞瘤、卵巢癌和肝细胞癌的不良预后相关。

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规格

其他规格
应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：神经科学
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64HH3PEH

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