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HTRF (H) PR TOTAL KIT - 500 PTS

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品牌： Revvity

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概述

HTRF 人源孕酮受体检测可监测多种细胞中内源性或过表达孕酮受体的表达水平。该试剂盒可识别 PRA 和 PRB 两种亚型。

孕酮受体（PR）是一种核受体，可被孕酮激活。孕酮穿过细胞膜并与受体结合，结合后 PR 发生同源二聚化，从而能够转运至细胞核内。受体二聚体与共激活因子结合后，会被招募至孕酮应答元件（PRE），并诱导基因表达，进而调控细胞增殖与凋亡的平衡。孕酮受体的表达受雌激素受体调控，因此 PR 常被用作评估雌激素受体 α 功能的生物标志物。此外，有研究表明 MAPK 激酶通路可通过磷酸化作用影响 PR 的活性。

工作原理

人源总孕酮受体检测试剂盒原理

HTRF 人源孕酮受体检测可定量测定细胞裂解物中孕酮受体的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。人源孕酮受体检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对蛋白质上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在孕酮受体时，加入这些偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会靠近并产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的表达水平。

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人源总孕酮受体检测试剂盒双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入人源孕酮受体 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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人源总孕酮受体检测试剂盒单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测人源孕酮受体可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

雌激素靶向化合物对雌激素受体和孕酮受体表达的影响

本实验以人乳腺癌细胞系 MCF7 为研究对象。将细胞以 50,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔培养板中，加入完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下过夜孵育。随后用他莫昔芬（SERM）、氟维司群（SERD）或 ERD-308（PROTAC）处理细胞 4 小时或 16 小时。处理后，加入 50 µL 补充的裂解缓冲液，在室温下轻轻摇晃裂解细胞 30 分钟。检测时，将 16 µL 细胞裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 人源雌激素受体 α 或 HTRF 人源孕酮受体检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。

结果符合预期：他莫昔芬对雌激素受体无显著影响，但会诱导孕酮受体表达降低；氟维司群和 ERD-308 会导致雌激素受体 α 和孕酮受体表达均降低。与对孕酮受体的影响相比，这些化合物对雌激素受体的作用更迅速，这与文献报道一致。

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MCF7 细胞中雌激素受体化合物处理实验

将人乳腺癌细胞系 MCF7 以 50,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔培养板中，加入完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下过夜孵育。用雌二醇（激动剂）、他莫昔芬（SERM）、氟维司群（SERD）或 ERD-308（PROTAC）处理细胞 16 小时。处理后，加入 50 µL 补充的裂解缓冲液，在室温下轻轻摇晃裂解细胞 30 分钟。检测时，将 16 µL 细胞裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 人源孕酮受体检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。

结果符合预期：氟维司群、ERD-308 和他莫昔芬诱导孕酮受体表达呈剂量依赖性降低，而雌二醇无此作用。

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简化通路

孕酮受体信号通路

孕酮受体（PR）是一种核受体，可被孕酮激活。孕酮穿过细胞膜并与受体结合，结合后 PR 发生同源二聚化，从而能够转运至细胞核内。受体二聚体与共激活因子结合后，会被招募至孕酮应答元件（PRE），并诱导基因表达，进而调控细胞增殖与凋亡的平衡。

孕酮受体的表达受雌激素受体调控，因此 PR 常被用作评估雌激素受体 α 功能的生物标志物。此外，有研究表明 MAPK 激酶通路可通过磷酸化作用影响 PR 的活性。

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规格

其他规格
应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液
分子修饰：总量
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

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货号：64HPRTPEG

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