HTRF EGFR P-PAN KIT - 50K PTS

概述

泛磷酸化EGFR检测试剂盒旨在基于细胞对EGFR上所有酪氨酸磷酸化进行定量检测。导致EGFR（也称为ErbB1或HER1）过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，如肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等。这使得EGFR成为抗癌治疗相关免疫检测的关键靶点。 工作原理 磷酸化EGFR（泛）检测原理 泛磷酸化EGFR检测可对处于磷酸化状态的EGFR进行检测。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。泛磷酸化EGFR检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能够识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生FRET信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒 泛磷酸化EGFR双板检测方案 双板方案包括：先在96孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至384孔小体积检测板，再加入泛磷酸化EGFR HTRF检测试剂。该方案可监测细胞活力和融合度。 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒 泛磷酸化EGFR单板检测方案 使用HTRF试剂检测泛磷酸化EGFR可在同一板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。此高通量筛选（HTS）设计方案可实现微型化，同时保持稳定的HTRF检测质量。 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒 检测验证 EGF对A431细胞的剂量反应 将人A431细胞（5,000个细胞/孔）在37°C下用不同浓度的EGF刺激30分钟。裂解孵育30分钟后，采用泛EGFR检测的单板检测方案对磷酸化EGFR进行检测。 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒 EGFR磷酸化的抑制 将细胞接种在96孔板中，孵育24小时。用不同剂量的抑制剂预处理后，再用EGF刺激细胞。细胞裂解后，将裂解物转移至384孔白色检测板中，加入HTRF磷酸化EGFR检测试剂。孵育过夜后记录HTRF信号。结果表明，HTRF磷酸化EGFR检测可用于解析靶向EGFR的小分子和生物制剂的作用机制。 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒 EGFR磷酸化的抑制 用不同剂量的两种酪氨酸激酶抑制剂——厄洛替尼和拉帕替尼预处理细胞。使用非抑制剂化合物PQ401作为对照（左图1）。用不同剂量的治疗性单克隆抗体西妥昔单抗预处理细胞。使用非抑制性单克隆抗体对照（15441）作为对照（右图2）。 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒 简化通路 EGFR表皮生长因子受体信号传导简化通路 EGFR是一种受体酪氨酸激酶，属于ErbB家族。EGFR配体的结合会驱动受体同源二聚化或异源二聚化，从而激活EGFR酪氨酸激酶结构域和特定的酪氨酸残基。磷酸化的酪氨酸残基随后为多种因子提供结合位点，这些因子会诱导多个信号转导级联反应的下游激活。从EGF受体传递到细胞核的信号会调节多种生物学功能，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。导致EGFR过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，这使得EGFR成为抗癌治疗的关键靶点。 泛磷酸化EGFR细胞检测试剂盒

规格

其他规格 应用 细胞信号传导 品牌 HTRF 检测方式 HTRF 分子修饰 磷酸化 产品类别 试剂盒 样品体积 16 µL 运输条件 干冰运输 靶标类别 磷酸化蛋白 靶标物种 人 技术 时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） 治疗领域 肿瘤学与炎症 单位规格 50,000个检测点