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HTRF HER2 P-Y1221/1222 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）检测试剂盒旨在对 HER2 - Erbb2 在 Tyr1221/1222 位点磷酸化时的调控进行可靠定量，而该位点的磷酸化是多种癌症病理状态的指示标志。人表皮生长因子受体 2（HER2，也称为 ErbB2 受体）的上调与人类乳腺癌及其他多种癌症相关，如卵巢癌、胃癌、膀胱癌、唾液腺癌和肺癌等，这使得 HER2 成为抗癌治疗的关键靶点。

工作原理

磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）检测原理

磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）检测试剂盒用于检测在 Tyr1221/1222 位点发生磷酸化的 HER2。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号的强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，并且提供了一种在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质磷酸化状态的方法。

磷酸化 HER2 细胞检测试剂盒

磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后再加入磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 HER2 细胞检测试剂盒

磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持可靠的 HTRF 检测质量。

磷酸化 HER2 细胞检测试剂盒

检测验证

HTRF 磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）检测与蛋白质印迹法的比较

人 SKOV3 细胞在 37°C 的 T175 培养瓶中生长至 80% 汇合度。然后用 100nM 表皮生长因子（EGF）刺激细胞 10 分钟。移除培养基后，用 3mL 补充的裂解缓冲液在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。在补充的裂解缓冲液中对细胞裂解物进行系列稀释，取 16μL 每种稀释液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。使用 HTRF 磷酸化 HER2（Tyr1221/1222）检测时，仅需 1500 个细胞即可实现最低信号检测，而蛋白质印迹法则需要 12500 个细胞才能产生信号。HTRF 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 8 倍，且两者具有良好的相关性。

磷酸化 HER2 细胞检测试剂盒

多种人类肿瘤细胞系中磷酸化 HER2 的调控

将 100,000 个人类 SKOV3、SK - BR - 3、A431 和 MCF - 7 细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的小鼠表皮生长因子（mEGF）孵育 10 分钟后，移除培养基，在室温下用 50μL 裂解缓冲液轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16μL 裂解物转移到 384 孔白色微量检测板中，并加入 4μL HTRF 磷酸化 HER2 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

磷酸化 HER2 细胞检测试剂盒

酪氨酸激酶抑制剂和单克隆抗体对磷酸化 HER2 的抑制作用

实验在 SKOV3 细胞上进行。将 100,000 个细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时，然后用不同剂量的抑制剂（曲妥珠单抗、西妥昔单抗、帕妥珠单抗等治疗性单克隆抗体以及拉帕替尼等酪氨酸激酶抑制剂）预处理后，在 37°C、5% CO₂条件下用 mEGF 刺激细胞 10 分钟。完成上述步骤后，移除培养基，在室温下用 50μL 裂解缓冲液轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16μL 裂解物转移到 384 孔白色微量检测板中进行检测，并加入 4μL HTRF 磷酸化 HER2 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果表明，HTRF 磷酸化 HER2 检测可用于阐明靶向 HER2 的小分子药物和生物制剂的作用机制。

磷酸化 HER2 细胞检测试剂盒

简化通路

HER2 表皮生长因子信号通路

HER2 是一种受体酪氨酸激酶，属于表皮生长因子受体（EGFR）家族中的 ErbB 家族。HER2 存在于细胞表面，是目前发现的唯一尚未找到配体的 EGFR 家族成员。HER2 受体激活会诱导其自身在 Tyr1221/1222 位点发生磷酸化，这为多种衔接蛋白、激酶和磷酸酶提供了结合位点，进而诱导多条信号转导通路的下游激活，主要包括 MAPK/ERK/JNK 通路和 PI3K/AKT 通路。HER2/ErbB 受体的信号转导调控着多种生物学过程，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。HER2 的过度活跃与癌症相关，这使其成为抗癌治疗的关键靶点。

磷酸化 HER2 细胞检测试剂盒

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16μL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人类
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR - FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64HR2PEY

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