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HTRF CJUN P-S63 KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

磷酸化 c-Jun（Ser63）细胞检测试剂盒旨在直接对细胞裂解物中 Ser63 位点磷酸化的 c-Jun 进行稳定定量分析。该试剂盒采用简化的 “混合即读、无需洗涤” 实验流程，可广泛应用于从基础研究到高通量药物筛选的各类场景。

工作原理

磷酸化 c-Jun（Ser63）检测原理

磷酸化 c-Jun（Ser63）检测用于测定 Ser63 位点磷酸化的 c-Jun。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质的磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

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磷酸化 c-Jun（Ser63）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 c-Jun（Ser63）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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磷酸化 c-Jun（Ser63）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 c-Jun（Ser63）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

phospho-how-it-works-phospho-c-jun-ser63-1-plate-assay-protocol

检测验证

磷酸化 c-Jun（Ser63）试剂盒的蛋白质印迹法与 HTRF 检测比较

HEK293 细胞培养两天后，用 500nM 茴香霉素刺激 30 分钟。移除细胞培养基后，加入裂解缓冲液并孵育细胞 30 分钟。离心后收集上清，取等量裂解物进行蛋白质印迹法（WB）与 HTRF 的平行比较。结果证实，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。

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磷酸化 c-Jun 试剂盒：茴香霉素对 NIH-3T3 细胞的剂量反应实验

将小鼠 NIH-3T3 细胞（50,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的茴香霉素刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用磷酸化 c-Jun 检测的双板方案测定磷酸化 c-Jun 水平。

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c-Jun 对茴香霉素刺激的 HEK293 细胞的抑制作用

HEK293 细胞（50,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的细胞渗透性 c-Jun 肽孵育 1 小时，随后加入 50nM 茴香霉素（激动剂）继续孵育 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用磷酸化 c-Jun 检测的双板方案测定 c-Jun 磷酸化的抑制水平。

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简化通路

c-Jun 蛋白家族的简化通路

c-Jun 属于哺乳动物 Jun 蛋白家族，该家族成员为转录因子，需形成二聚体才能结合至靶 DNA 位点。c-Jun 是激活蛋白 1（AP-1）复合物的主要组成部分。JNK 通过磷酸化 c-Jun 的 Ser63 和 Ser73 位点激活 AP-1。c-Jun 磷酸化后可形成二聚体并结合至 DNA 序列，进而影响转录过程。c-Jun 调控多种细胞反应，包括增殖、恶性转化、分化和凋亡。

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规格参数

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、肿瘤与炎症
单位规格：10,000 次检测

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货号：64JUNPEH

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