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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF CJUN P-S63 KIT - 50K PTS

概述

磷酸化 c-Jun(Ser63)细胞检测试剂盒旨在对细胞裂解物中 Ser-63 位点磷酸化的 c-Jun 进行可靠定量。该试剂盒采用简化的混合即读、无需洗涤的方案,可用于从基础研究到高通量药物筛选等多种场景。

工作原理

磷酸化 c-Jun(Ser63)检测原理

磷酸化 c-Jun(Ser63)检测用于测量在 Ser63 位点发生磷酸化的 c-Jun。与蛋白质印迹法(Western Blot)不同,该检测完全基于微孔板进行,无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 c-Jun(Ser63)检测使用两种标记抗体:一种标记供体荧光团,另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序,第二种抗体则能识别该蛋白质,且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物,使供体荧光团与受体荧光团靠近,从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比,且该检测采用无需洗涤的格式,可用于评估蛋白质的磷酸化状态

磷酸化 c-Jun(Ser63)双板检测方案

双板方案包括:先在 96 孔板中培养细胞,然后进行裂解,再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中,之后加入磷酸化 c-Jun(Ser63)HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。


磷酸化 c-Jun(Ser63)单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 c-Jun(Ser63)可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行,无需洗涤步骤。这种为高通量筛选(HTS)设计的方案可实现微型化,同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

磷酸化 c-Jun(Ser63)试剂盒的蛋白质印迹法与 HTRF 检测比较

HEK293 细胞培养两天,用 500nM 茴香霉素刺激 30 分钟。移除细胞培养基后,加入裂解缓冲液,孵育细胞 30 分钟。离心后收集上清液,使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法(WB)与 HTRF 的平行比较。结果表明,HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。


磷酸化 c-Jun 试剂盒对 NIH-3T3 细胞的茴香霉素剂量反应

小鼠 NIH-3T3 细胞(50,000 个细胞 / 孔)在 37°C 下用不同浓度的茴香霉素刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后,使用磷酸化 c-Jun 检测的双板检测方案测量磷酸化 c-Jun。


c-Jun 对茴香霉素刺激的 HEK293 细胞的抑制作用

HEK293 细胞(50,000 个细胞 / 孔)在 37°C 下与不同浓度的细胞渗透性 c-Jun 肽孵育 1 小时。然后加入 50nM 茴香霉素(激动剂)并孵育 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后,使用磷酸化 c-Jun 检测测量 c-Jun 磷酸化的抑制情况。该检测采用双板检测方案。

简化通路

c-Jun 蛋白家族的简化通路

c-Jun 属于哺乳动物 Jun 蛋白家族,该家族成员为转录因子,需二聚化后才能结合其靶 DNA 位点。c-Jun 是激活蛋白 1(AP-1)复合物的主要成分。JNK 通过磷酸化 c-Jun 的 Ser63 和 Ser73 位点来刺激 AP-1。c-Jun 磷酸化后可发生二聚化并结合 DNA 序列,从而影响转录过程。c-Jun 调控多种细胞反应,包括增殖、恶性转化、分化和凋亡。

规格

其他规格

  • 应用:细胞信号传导
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 分子修饰:磷酸化
  • 产品类别:试剂盒
  • 样品体积:16 µL
  • 运输条件:干冰运输
  • 靶标类别:磷酸化蛋白
  • 靶标物种:人、小鼠
  • 技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
  • 治疗领域:非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化(NASH/Fibrosis)、肿瘤学与炎症
  • 单位规格:50,000 个检测点


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