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HTRF MEK1 P-S218/222 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 MEK1（Ser218/222）试剂盒可在研究 MAPK/ERK 通路中的 RAS-RAF-MEK 级联反应时，检测内源性在 Ser218/222 位点磷酸化的 MEK1 蛋白。这种双重特异性丝裂原活化蛋白激酶经 RAF 磷酸化后，负责磷酸化 ERK（细胞增殖、存活和分化通路中最重要的信号节点和蛋白激酶之一）。

工作原理

磷酸化 MEK1（Ser218/222）检测原理

磷酸化 MEK1（Ser218/222）检测用于测量在 Ser218/222 位点发生磷酸化的 MEK1。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 MEK1（Ser218/222）检测使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 MEK1（Ser218/222）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中，之后加入磷酸化 MEK1（Ser218/222）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

磷酸化 MEK1（Ser218/222）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 MEK1（Ser218/222）可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

磷酸化 MEK1（Ser218/222）的蛋白质印迹法与 HTRF 检测比较

HeLa 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。用 2nM 表皮生长因子（EGF）刺激 5 分钟。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充的裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用等量的裂解物进行蛋白质印迹法（WB）与 HTRF 的平行比较。结果显示，磷酸化 MEK1 检测与蛋白质印迹法的灵敏度相当。

PMA 对 NIH 3T3 细胞的剂量反应

小鼠 NIH 3T3 细胞（25,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的佛波酯（PMA）刺激 15 分钟。裂解孵育 30 分钟后，使用双板检测方案测量磷酸化 MEK1。

EGFR 和 RAF 抑制剂对 HeLa 细胞的抑制作用

HeLa 细胞（50,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下与不同浓度的两种抑制剂（厄洛替尼，一种 EGFR 抑制剂；以及 L777,450，一种 RAF 抑制剂）孵育 15 分钟。然后加入 0.8nM EGF（激动剂）并孵育 10 分钟。裂解孵育 30 分钟后，使用磷酸化 MEK1 检测测量磷酸化 MEK 的抑制情况。该检测采用双板检测方案。

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管疾病、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64ME1PEY

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