总组蛋白 H3(Total Histone H3)细胞检测试剂盒可作为磷酸化组蛋白 H3(phospho-Histone H3)试剂盒的标准化检测工具。组蛋白 H3 是基因表达和细胞有丝分裂的关键调控因子,因此成为癌症研究领域的重要工具。
总组蛋白 H3 检测可对细胞裂解液中组蛋白 H3 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法(Western Blot)不同,该检测为全板基检测,无需凝胶、电泳或转膜步骤。
总组蛋白 H3 检测使用两种标记抗体:一种偶联供体荧光团,另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对组蛋白 H3 蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在组蛋白 H3 时,加入上述偶联抗体后,供体荧光团与受体荧光团会近距离接触,进而产生荧光共振能量转移(FRET)信号。该信号强度与样品中组蛋白 H3 的浓度呈直接正相关,且可通过 “免洗涤” 检测模式评估目标蛋白的表达水平。
双板检测方案的流程如下:首先在 96 孔板中培养细胞,随后进行裂解;将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后,加入总组蛋白 H3 HTRF 检测试剂。此方案可对细胞活力和融合度进行监测。
使用 HTRF 试剂检测总组蛋白 H3 时,可在同一块培养板中完成细胞培养、刺激和裂解操作,无需洗涤步骤。该方案专为高通量筛选(HTS)设计,在实现实验微型化的同时,仍能保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。
将 NIH3T3 细胞(每孔 12.5×10³ 个细胞)接种于 96 孔板中,并用诺考达唑(Nocodazole,一种抗有丝分裂剂,可使微管解聚并将细胞阻滞在有丝分裂阶段)处理细胞,以诱导组蛋白 H3(Ser10)磷酸化。
实验分为两组:
- 实验组 a:细胞同时用抑制剂达努塞替(Danusertib)处理 16 小时;
- 实验组 b:细胞不进行达努塞替共处理。
移除细胞培养基后,加入 200 微升(µL)添加了补充剂的裂解缓冲液,孵育 30 分钟。随后分别取 10 微升裂解液转移至 384 孔白色检测板(384sv)中,同时进行总组蛋白 H3 检测和磷酸化组蛋白 H3(Ser10)检测的 HTRF 平行分析。
组蛋白 H3(Histone H3)是 5 种主要经典组蛋白之一,主要功能是将 DNA 压缩形成染色质。组蛋白的核心球形结构域位于其较长的 N 端尾部,该尾部存在大量翻译后修饰,且这些修饰决定了染色质是形成高度浓缩的异染色质(heterochromatin)还是松散的常染色质(euchromatin)。
组蛋白上不同类型的协同修饰(如乙酰化、甲基化、磷酸化)共同构成 “组蛋白密码”,并被染色质重塑复合物识别。因此,组蛋白修饰在基因的动态调控和长期调控中发挥关键作用,可影响周围 DNA 对转录机器的可及性。其中,组蛋白 H3 尾部的 Ser10(丝氨酸 10)或 Thr3(苏氨酸 3)磷酸化修饰,与基因表达调控及细胞有丝分裂过程密切相关。
- 应用领域(Application):细胞信号通路(Cell Signaling)
- 品牌(Brand):HTRF
- 检测方式(Detection Modality):HTRF(均相时间分辨荧光)
- 分子修饰(Molecular Modification):总蛋白(Total)
- 产品类别(Product Group):试剂盒(Kit)
- 样品体积(Sample Volume):16 微升(µL)
- 运输条件(Shipping Conditions):干冰运输(Shipped in Dry Ice)
- 目标类别(Target Class):磷酸化蛋白(Phosphoproteins)
- 目标物种(Target Species):人(Human)、小鼠(Mouse)
- 技术平台(Technology):TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
- 治疗领域(Therapeutic Area):神经科学(Neuroscience)
- 单位规格(Unit Size):500 个检测点(500 assay points)
- HTRF:均相时间分辨荧光(Homogeneous Time-Resolved Fluorescence)技术,常用于生物分子相互作用检测,具有高特异性、高灵敏度及免洗涤的特点。
- TR-FRET:时间分辨荧光共振能量转移(Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer),结合了时间分辨荧光和荧光共振能量转移技术,可有效降低背景荧光干扰。
- 组蛋白密码(Histone Code):指组蛋白翻译后修饰(如磷酸化、乙酰化等)的组合模式,这些模式可调控染色质状态及基因表达,是表观遗传学的重要研究内容。