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HTRF (H) MEK1 P-S298 KIT - 10K PTS

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概述

磷酸化 MEK1（Ser298）检测试剂盒可对在 Ser298 位点发生磷酸化的内源性 MEK1 蛋白进行定量检测，助力 MAPK/ERK 通路中 RAS-RAF-MEK 级联反应的相关研究。MEK1 是一种双特异性丝裂原活化蛋白激酶，经 RAF 磷酸化后，负责对 ERK 进行磷酸化

修饰。ERK 作为最重要的信号节点之一，也是细胞增殖、存活和分化通路中的关键蛋白激酶。

工作原理

磷酸化 MEK1（Ser298）检测原理

磷酸化 MEK1（Ser298）检测可对在 Ser298 位点磷酸化的 MEK1 进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的格式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了便捷方法。

磷酸化 MEK1（Ser298）双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解物转移至 384 孔低体积检测板后，再加入磷酸化 MEK1（Ser298）HTRF 检测试剂。该方案能够对细胞活力和汇合度进行监测。

磷酸化 MEK1（Ser298）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 MEK1（Ser298）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解步骤，且无需洗涤步骤。此高通量筛选（HTS）专用方案支持实验微型化，同时能保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

对 HeLa 细胞中磷酸化 MEK1（Ser298）的检测

在 T175 培养瓶中培养 HeLa 细胞，当细胞汇合度达到 80% 时，移除细胞培养液，加入 3mL 完全裂解缓冲液（1X）。在轻柔振荡条件下进行 30 分钟的裂解反应，随后收集裂解物并进行稀释。将各稀释液取 16µL 转移至 384 孔板中，用于磷酸化 MEK1（Ser298）的检测。

规格参数

其他规格：无特殊说明
应用领域：细胞信号传导研究
自动化兼容性：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：兼容裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人
技术原理：TR-FRET
治疗领域：心血管疾病、神经科学、肿瘤与炎症
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64MEK1S98PEH

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