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HTRF (H) MET P-Y1234/1235 KIT - 10K PTS

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概述

c-MET，也称为酪氨酸蛋白激酶 MET 或肝细胞生长因子受体（HGFR），是由人类 MET 基因编码的具有酪氨酸激酶活性的蛋白质。它作为酪氨酸激酶受体发挥作用，功能涉及伤口愈合、器官发生和胚胎发育。

MET 在上皮细胞中表达，由肝细胞因子 HGF 和 HSF 激活，其信号可传导至多种通路，如 RAS-MAPK、AKT 和 STAT3 信号通路。

MET 的异常激活与癌症进展相关，会影响肿瘤生长、血管生成以及肿瘤细胞的迁移和侵袭。MET 与肿瘤细胞之间的这种关联存在于多种癌症类型中（如肝癌、脑癌、乳腺癌、肾癌等），推测其源于对 MET 及其配体表达调控的 “劫持”，这导致它们过度表达并引发 MET 的自分泌激活。

工作原理

HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 检测原理

HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 检测用于测定在酪氨酸 1234/1235 位点发生磷酸化的 MET。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且可在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

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HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入磷酸化 MET Tyr1234/1235 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 MET Tyr1234/1235 可在单个用于培养、刺激和裂解的微孔板中进行，无需洗涤步骤。这种专为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

HGF 刺激的 A431 细胞中磷酸化 MET 和总 MET 检测的验证

将 A431 细胞以 10µL 的体积接种到 96 孔板中（100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基在 37ºC、5% CO₂条件下过夜孵育。次日，移除培养基并加入 50µL 完全培养基，在 37ºC、5% CO₂条件下孵育 2 小时。孵育后，用 50µL 不同浓度的人 HGF（用完全培养基稀释）处理细胞，在 37ºC、5% CO₂条件下孵育 15 分钟。移除培养基后，用 60µL 2 号裂解缓冲液和磷酸化 - 总蛋白封闭试剂在室温下轻轻振荡裂解细胞 45 分钟。裂解后，将 16µL 裂解物转移至低体积白色微孔板中，然后分别加入 2µL 供体和受体 HTRF 磷酸化 MET（Y1234/1235）或总 MET 检测试剂。室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。

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规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：2 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：10,000 次检测

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货号：64METY34PEH

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