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HTRF (H) MET P-Y1234/1235 KIT - 50K PTS

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概述

c-MET，也称为酪氨酸蛋白激酶 MET 或肝细胞生长因子受体（HGFR），是一种由人类 MET 基因编码的具有酪氨酸激酶活性的蛋白质。它作为一种酪氨酸激酶受体，其功能与伤口愈合、器官发生和胚胎发育相关。

MET 在 epithelial 细胞中表达，由肝细胞因子 HGF 和 HSF 触发，并涉及多种通路，如 RAS-MAPK、AKT 和 STAT3 信号通路。

MET 的异常激活与癌症进展相关，会影响肿瘤生长、血管生成以及肿瘤细胞的迁移和侵袭。MET 与肿瘤细胞之间的这些关系存在于多种癌症类型中（如肝癌、脑癌、乳腺癌、肾癌等），推测其源于对 MET 及其配体表达调控的 “劫持”，这导致了它们的过表达以及 MET 的自分泌激活。

工作原理
HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 检测原理
HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 检测用于测量在酪氨酸 1234/1235 位点发生磷酸化的 MET。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。该检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖于蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的形式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了一种方法。

HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 双板检测方案
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移到低体积检测板（HTRF 384 孔低体积板或 96 孔低体积板）中，之后再加入 HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

HTRF 磷酸化 MET Tyr1234/1235 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 MET Tyr1234/1235 可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
在 HGF 刺激的 A431 细胞中对磷酸化和总 MET 检测的验证
将 A431 细胞以 10µL 的量接种到 96 孔板中（每孔 100,000 个细胞），使用完全培养基，在 37ºC、5% CO₂条件下过夜培养。次日，移除培养基，加入 50µL 完全培养基，然后在 37ºC、5% CO₂条件下孵育 2 小时。孵育后，向细胞中加入 50µL 不同浓度的人 HGF（用完全培养基稀释），在 37ºC、5% CO₂条件下处理 15 分钟。移除培养基，然后用 60µL 裂解缓冲液 #2 和磷酸化 - 总蛋白封闭试剂在室温下轻轻振荡裂解细胞 45 分钟。裂解后，将 16µL 裂解物转移到低体积白色微孔板中，然后分别加入 2µL HTRF 磷酸化 MET（Y1234/1235）或总 MET 检测试剂的供体和受体。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

规格参数

其他规格参数
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：裂解缓冲液 2
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白质
目标物种：人类
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

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货号：64METY34PEY

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