当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF STING P-S365 (M) KIT - 10K PTS

HTRF STING P-S365 (M) KIT - 10K PTS

分享给好友

下载产品资料

rvty_ls_manual_64MSTGPEG-64MSTGPEH

下载SDS

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

这款基于 HTRF 的细胞检测试剂盒可便捷、准确地定量小鼠丝氨酸 365（Ser365）位点磷酸化的 STING。在病原体感染后，双链 DNA（dsDNA）与胞质传感器 cGAS 结合，随后 STING 蛋白被 TBK1 磷酸化。这使其能够与 IRF3 结合，进而诱导 1 型干扰素的产生及其他免疫应答。之后，STING 通路通过自噬相关的 STING 降解过程被关闭。

工作原理

小鼠磷酸化 STING（Ser365）检测原理

小鼠磷酸化 STING（Ser365）检测用于测定 Ser365 位点磷酸化的小鼠 STING。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。小鼠磷酸化 STING（Ser365）检测使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且可在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

phospho-how-it-works-sting-s365-mouse-assay-principle

小鼠磷酸化 STING（Ser365）双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至低体积检测板（HTRF 384 孔低体积板或 96 孔低体积板均可），再加入 HTRF 小鼠磷酸化 STING（Ser365）检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

phospho-how-it-works-sting-s365-mouse-assay-protocol-1

小鼠磷酸化 STING（Ser365）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测小鼠磷酸化 STING（Ser365）可在单个用于培养、刺激和裂解的微孔板中进行，无需洗涤步骤。这种专为高通量筛选（HTS）设计的方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

phospho-how-it-works-sting-s365-mouse-assay-protocol-2

检测验证

DMXAA 诱导 RAW 264.7 和 NIH3T3 细胞中鼠源 STING 的磷酸化

将 RAW264.7 细胞和 NIH3T3 细胞以 50 µL 的体积接种到 96 孔板中（分别为 200,000 个细胞 / 孔和 100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基培养并过夜孵育。用不同浓度的小鼠特异性配体 DMXAA（50 µL）刺激细胞 1 小时。处理后，加入 50 µL 补充的 4 号裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF 磷酸化鼠源 STING 或总鼠源 STING 检测抗体。最后，在室温下孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。DMXAA 可显著激活 STING 通路，使 RAW264.7 细胞和 NIH3T3 细胞中 STING 的磷酸化水平分别提高 8 倍和 6 倍。

assay-validation-sting-s365-mouse-1

assay-validation-sting-s365-mouse-2

ADU-S100 诱导 RAW 264.7 和 NIH3T3 细胞中鼠源 STING 的磷酸化

将 RAW264.7 细胞和 NIH3T3 细胞以 50 µL 的体积接种到 96 孔板中（分别为 200,000 个细胞 / 孔和 100,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基培养并过夜孵育。用不同浓度的环二腺苷酸（c-di-AMP）类似物 ADU-S100（50 µL）刺激细胞 1 小时。处理后，加入 50 µL 补充的 4 号裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF 磷酸化鼠源 STING 或总鼠源 STING 检测抗体。最后，在室温下孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。ADU-S100 可显著激活 STING 通路，使 RAW264.7 细胞和 NIH3T3 细胞中 STING 的磷酸化水平分别提高 9 倍和 5 倍。诱导的 STING 磷酸化伴随其表达水平的下调，这与自噬介导的降解过程一致。

assay-validation-sting-s365-mouse-3

assay-validation-sting-s365-mouse-4

3’3’- 环鸟苷酸 - 腺苷酸（3’3’cGAMP）诱导 RAW264.7 细胞中鼠源 STING 的磷酸化

将 RAW264.7 细胞以 50 µL 的体积接种到 96 孔板中（200,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基培养并过夜孵育。用不同浓度的细菌环二核苷酸配体 3’3’cGAMP（50 µL）刺激细胞 1 小时。处理后，加入 50 µL 补充的 4 号裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF 磷酸化鼠源 STING 或总鼠源 STING 检测抗体。最后，在室温下孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。3’3’cGAMP 可显著激活 STING 通路，使 STING 的磷酸化水平提高 5 倍。

assay-validation-sting-s365-mouse-5

2’3’- 环鸟苷酸 - 腺苷酸（2’3’cGAMP）诱导 RAW264.7 细胞中鼠源 STING 的磷酸化

将 RAW264.7 细胞以 50 µL 的体积接种到 96 孔板中（200,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基培养并过夜孵育。用不同浓度的非经典环鸟苷酸 - 腺苷酸 2’3’cGAMP（50 µL）刺激细胞 1 小时。处理后，加入 50 µL 补充的 4 号裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF 磷酸化鼠源 STING 或总鼠源 STING 检测抗体。最后，在室温下孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。3’3’cGAMP 可显著激活 STING 通路，使 STING 的磷酸化水平提高 4 倍。诱导的 STING 磷酸化伴随其表达水平的下调，这与自噬介导的降解过程一致，而在此条件下 α- 微管蛋白（alpha-tubulin）的水平保持稳定。

assay-validation-sting-s365-mouse-6

assay-validation-sting-s365-mouse-7

HTRF 鼠源磷酸化 STING 细胞检测与蛋白质印迹法的比较

将 RAW264.7 细胞系接种到 T175 培养瓶中，使用完全培养基培养，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 2 天。随后用 100 µM DMXAA 刺激细胞 1 小时，加入 3 mL 补充的 4 号裂解缓冲液，在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液转移至低体积白色微孔板，然后加入 4 µL HTRF 鼠源磷酸化 STING 检测试剂。取等量裂解物通过 HTRF 检测与蛋白质印迹法进行平行对比。

蛋白质印迹法与 HTRF 的平行对比表明，在该实验条件下两种技术的灵敏度相同。

assay-validation-sting-s365-mouse-8

简化通路

STING 简化通路

STING（干扰素基因刺激蛋白）是一种定位于内质网的胞质同源二聚体蛋白，在先天免疫中发挥关键作用。当病原体感染或凋亡过程中线粒体收缩时，游离的双链 DNA 结合并激活 DNA 传感器 —— 环 GMP-AMP 合酶（cGAS）。激活的 cGAS 会催化生成 2’-3’环鸟苷酸 - 腺苷酸（2’-3’cGAMP）这一环状二核苷酸，后者继而与 STING 蛋白结合。随后，磷酸化的 STING 与 TANK 结合激酶 1（TBK1）相互作用，招募并激活干扰素调节因子 3（IRF3）二聚体。IRF3 二聚体进入细胞核后，启动编码干扰素 -α/β（IFN-α/β）的基因转录。此外，STING 通路还调控 NF-κB 依赖性炎症细胞因子的表达。作为负反馈调节，DNA 刺激的 cGAS-STING-TBK1 通路还会通过 p62 SQSTM1 相关的自噬触发 STING 蛋白降解，从而关闭干扰素 β（IFNβ）的产生。

phospho-pathway-sting-mouse-64mstgpeg

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：4 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：10,000 个检测点

没有数据

货号：64MSTGPEH

一键复制

参考价格 ¥ 172916.60

产品规格

请咨询￥172916.60

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价