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HTRF B-CATENIN TOTAL KIT - 10K PTS

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概述

总 β- 连环蛋白（Total ß-Catenin）细胞检测试剂盒可对总 β- 连环蛋白进行稳定监测，且可与磷酸化 β- 连环蛋白检测试剂盒搭配作为归一化检测工具。总 β- 连环蛋白是一种重要的共转录激活因子，参与调控众多与胚胎发育、成人稳态及细胞增殖相关的关键基因。

工作原理

总 β- 连环蛋白检测原理

总 β- 连环蛋白检测可对细胞裂解物中 β- 连环蛋白的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测中使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 β- 连环蛋白时，添加这些偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中目标蛋白的浓度直接成正比，且该检测采用 “无需洗涤” 的格式，为评估蛋白表达提供了便捷手段。

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总 β- 连环蛋白双板检测方案

双板方案流程为：先在 96 孔板中培养细胞，待裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再添加总 β- 连环蛋白 HTRF 检测试剂。该方案可对细胞活力和汇合度进行监测。

total-beta-catenin-thr41-ser37-ser33-1-plate-protocol

总 β- 连环蛋白单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 β- 连环蛋白可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。此高通量筛选（HTS）设计方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

total-beta-catenin-thr41-ser37-ser33-2-plate-assay-protocol

检测验证

利用磷酸化 β- 连环蛋白和总 β- 连环蛋白细胞检测对比 HTRF 检测与蛋白质印迹法

将人 HEK293 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养至 80% 汇合度，并用 5µM MG132 处理 3 小时。弃去细胞培养液，加入 3mL 补充裂解缓冲液，室温孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。将细胞裂解物用补充裂解缓冲液进行系列稀释，取 16µL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行分析。结果显示，HTRF 磷酸化 β- 连环蛋白（T41/S33/S37）检测与蛋白质印迹法灵敏度相当，而 HTRF 总 β- 连环蛋白检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 9 倍。

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利用磷酸化 β- 连环蛋白和总 β- 连环蛋白细胞检测评估 GSK3 抑制剂 BIO 对 HEK293 细胞的剂量反应

将 200,000 个人 HEK293 细胞接种于 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。随后用 MG-132 和递增浓度的 BIO 处理细胞 3 小时。细胞裂解步骤为：加入 50µL 裂解缓冲液，室温轻轻振荡孵育 30 分钟。取 16µL 裂解物转移至 384 孔白色微量检测板中，再加入 4µL HTRF 磷酸化 β- 连环蛋白和总 β- 连环蛋白检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

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通过 HTRF 磷酸化 β- 连环蛋白和总 β- 连环蛋白细胞检测评估 MG-132 对蛋白酶体活性的抑制作用

将 200,000 个人 HEK293 细胞接种于 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。随后用递增浓度的 MG-132 在不同孵育时间下处理细胞。细胞裂解步骤为：加入 50µL 裂解缓冲液，室温轻轻振荡孵育 30 分钟。取 16µL 裂解物转移至 384 孔白色微量检测板中，再加入 4µL HTRF 磷酸化 β- 连环蛋白和总 β- 连环蛋白检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

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简化通路

β- 连环蛋白在经典 Wnt 通路中的作用

在缺乏细胞外 WNT 配体时，胞质中的 β- 连环蛋白在 Thr41/Ser37/Ser33 位点发生磷酸化，进而被泛素化标记并降解失活。当细胞外 WNT 配体与 Frizzled 受体和 / 或低密度脂蛋白受体相关蛋白 LRP5/6 结合后，通过激活散乱蛋白（DVL）将信号传递至细胞内，导致降解复合体失活。这使得胞质中未磷酸化的 β- 连环蛋白得以积累，随后转运至细胞核内。

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规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：
- 3 号裂解缓冲液
- 4 号裂解缓冲液
- 5 号裂解缓冲液
分子修饰类型：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：
- 人
- 小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：
- 代谢 / 糖尿病
- 肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64NCAPEH

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