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HTRF EGFR TOTAL KIT - 10K PTS 总表皮生长因子受体检测试剂盒 - 10,000测试

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概述

总 EGFR 细胞检测试剂盒可监测总 EGFR 水平，并与我们的磷酸化 EGFR 试剂盒配合使用，作为标准化检测工具。导致 EGFR（也称为 ErbB1 或 HER1）过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，如肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等。这使 EG

FR 成为抗癌治疗相关免疫检测的关键靶点。

工作原理

总 EGFR 检测原理

总 EGFR 检测可定量细胞裂解物中 EGFR 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 EGFR 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 EGFR 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质表达水平。

（标注：phospho-how-it-works-total-egfr-assay-principle）

总 EGFR 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再添加总 EGFR HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞活力和融合度。

（标注：phospho-how-it-works-total-egfr-2-plate-assay-protocol）

总 EGFR 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 EGFR 可在单个培养板中完成，该板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种高通量筛选（HTS）设计的方案可实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

（标注：phospho-how-it-works-total-egfr-1-plate-protocol）

检测验证

HTRF 总 EGFR 检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

A431 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 48 小时。随后用 100 nM EGF 刺激细胞 10 分钟。移除培养基后，用 3mL 补充裂解缓冲液在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性组分。将细胞裂解物用补充裂解缓冲液进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行分析。使用 HTRF 总 EGFR 检测时，仅需 50 个细胞即可检测到最小信号，而蛋白质印迹法需要 780 个细胞才能产生信号。HTRF 总 EGFR 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 15 倍，且两者具有良好的相关性。

（标注：assay-validation-egfr-total-1）

（标注：assay-validation-egfr-total-2）

用磷酸化 EGFR（Tyr1068）和总 EGFR 细胞试剂盒测量抑制效果

人表皮样癌 A431 细胞用不同浓度的西妥昔单抗（一种胞外治疗性抗体）预处理 3 小时，然后用 200 nM EGF 刺激 10 分钟。
（标注：assay-validation-egfr-total-3）
人胰腺癌 BxPC3 细胞用不同浓度的 ATCC528（一种胞外单克隆抗体）预处理 30 分钟，然后用 200 nM EGF 刺激 10 分钟。
（标注：assay-validation-egfr-total-4）
人表皮样癌 A431 细胞用不同浓度的吉非替尼（一种小分子酪氨酸激酶抑制剂）预处理 3 小时，然后用 200 nM EGF 刺激 10 分钟。
（标注：assay-validation-egfr-total-5）

简化通路

EGFR（表皮生长因子受体）信号传导简化通路

EGFR 是一种受体酪氨酸激酶，属于 ErbB 家族。EGFR 配体的结合会驱动受体同源二聚化或异源二聚化，进而激活 EGFR 酪氨酸激酶结构域和特定酪氨酸残基的磷酸化。

磷酸化的酪氨酸残基随后为多种因子提供结合位点，这些因子可诱导下游多个信号转导通路的激活。

从 EGF 受体传递至细胞核的信号会调控多种生物学功能，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。

导致 EGFR 过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，这使 EGFR 成为抗癌治疗的关键靶点。

（标注：phospho-pathway-egfr-64ng1peg）

规格参数

其他规格：无特殊说明
应用领域：细胞信号传导研究
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：兼容裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
分子修饰类型：总蛋白（非磷酸化特异性）
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷蛋白（关联靶点）
目标物种：人
技术原理：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

没有数据

货号：64NG1PEH

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参考价格 ¥ 172916.60

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