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HTRF P38 P-T180/Y182 KIT 50K PTS

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品牌： Revvity

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概述

这款基于 HTRF 细胞的检测试剂盒能够便捷且准确地定量 Thr180/Tyr182 位点磷酸化的 p-38-MAPK。该试剂盒可应用于炎症、免疫反应和肿瘤学研究。其流程简洁，适用于小体积检测格式，可从基础研究扩展到高通量药物筛选。

工作原理
磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）检测原理
磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）检测可测定在 Thr180/Tyr182 位点发生磷酸化的 p38 MAPK。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）检测使用两种标记抗体：一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，该检测采用免洗涤格式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了便利手段。

磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）双板检测方案
双板方案的步骤为：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后再加入磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案可实现检测微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
HTRF 检测与基于磷酸化 p38 MAPK 细胞检测的蛋白质印迹法（WB）对比
HeLa 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。用 10µM 茴香霉素刺激 15 分钟。去除细胞培养基后，加入 3ml 补充的裂解缓冲液，孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取等量裂解物进行蛋白质印迹法与 HTRF 检测的平行对比。HTRF 检测的灵敏度高于蛋白质印迹法：HTRF 检测仅需 2500 个细胞，而蛋白质印迹法需要 10,000 个细胞。

茴香霉素对 NIH 3T3 细胞的剂量反应
小鼠 NIH 3T3 细胞（50,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的茴香霉素刺激 45 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案测定磷酸化 p38 MAPK。

茴香霉素对 HeLa 细胞的剂量反应
不同浓度的 HeLa 细胞（25,000、50,000 和 100,000 个细胞 / 孔）在 37°C 下用不同浓度的茴香霉素孵育 45 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案测定磷酸化 p38 MAPK。

简化通路
磷酸化 p38 MAPK（Thr180/Tyr182）简化通路
p38 MAPK 可被多种细胞应激激活，包括渗透压休克、炎性细胞因子、脂多糖（LPS）、紫外线和生长因子。它参与细胞分化和凋亡过程。有研究表明，激活的 p38 MAPK 可磷酸化并激活 MAPKAP 激酶 2，还可磷酸化转录因子 ATF-2、Max 和 MEF2。p38 MAPK 在炎症、免疫反应、凋亡、细胞分化、细胞周期调控和肿瘤发生中发挥着关键作用。

规格参数

其他规格参数
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白质
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管疾病、传染病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64P38PEY

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