当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF PLCG2 P-Y1217 KIT - 50K PTS

HTRF PLCG2 P-Y1217 KIT - 50K PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64PLCG2Y7PEY_US rvty_ls_sds_64PLCG2Y7PEY_UK rvty_ls_sds_64PLCG2Y7PEY_SPA rvty_ls_sds_64PLCG2Y7PEY_ITA rvty_ls_sds_64PLCG2Y7PEY_ELL rvty_ls_sds_64PLCG2Y7PEY_DEU rvty_ls_sds_64PLCG2Y7PEY_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

这种基于 HTRF 细胞的检测方法可方便、准确地检测 Tyr1217 位点磷酸化的磷脂酶 Cγ2（PLCγ2）。

PLCγ2 是一种磷酸肌醇特异性磷脂酶，可产生第二信使，在信号转导中发挥关键作用，尤其在造血细胞中，如 B 细胞、肥大细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞和血小板。当 B 细胞抗原受体（BCR）和 Fc 受体（FcRs）等不同受体受到刺激时，PLCγ2 会与多种衔接蛋白相互作用，并被细胞内酪氨酸激酶磷酸化。磷酸化涉及多个位点，其中之一便是 Tyr1217。

PLCγ2 与多种疾病相关，如自身免疫性疾病、炎症性疾病、癌症中的耐药性以及神经退行性疾病。

工作原理
磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）检测原理
磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）检测可对 Tyr1217 位点磷酸化的 PLCγ2 进行测定。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测过程使用两种抗体，一种标记有供体荧光团，另一种标记有受体荧光团。第一种抗体经筛选，可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序；第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤，即可评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）双板检测方案
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，再将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中，之后加入磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）可在单个板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
抗 IgM 刺激的 Ramos B 细胞中 PLCγ2 的激活
将人 B 细胞淋巴瘤 Ramos 细胞系以 400,000 个细胞 / 孔的密度接种到半区 96 孔培养处理板中，每孔加入 25 µL 完全培养基。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 3 小时后，每孔加入 5 µL 不同浓度的抗人 IgM 抗体刺激细胞 5 分钟，然后加入 10 µL 补充的 4X 裂解缓冲液 #4，在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。检测步骤中，将 16 µL 细胞裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）或总 - PLCγ2 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

抗人 IgM 抗体可诱导 Tyr1217 位点的 PLCγ2 磷酸化呈剂量依赖性增加，而不改变该蛋白质的表达水平，这表明细胞表面的 BCR 复合物被激活。

HTRF 磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）检测与蛋白质印迹法的比较
人 B 细胞淋巴瘤 Ramos 细胞系在 T175 培养瓶中的完全培养基中培养 48 小时，培养条件为 37°C、5% CO₂。离心后，沉淀的细胞用 20 µg/mL 的抗人 IgM 抗体刺激 5 分钟。然后加入 2X 裂解缓冲液 #4，在室温下轻轻振荡 30 分钟。

使用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 每种稀释液转移至小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL HTRF 磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 检测与蛋白质印迹法的平行比较。

使用 HTRF 磷酸化 - PLCγ2（Tyr1217）检测时，每孔 4,000 个细胞就足以检测到显著信号，而使用蛋白质印迹法则需要 8,000 个细胞才能获得最低的化学发光信号。因此，在这些条件下，HTRF 磷酸化 - PLCγ2 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 2 倍。

简化通路
PLCγ2 信号传导的简化通路
PLCγ2（磷脂酶 Cγ2）是一种胞质酪氨酸激酶，在信号转导中发挥关键作用，尤其在免疫细胞中，如 B 细胞和小胶质细胞（脑内驻留巨噬细胞）。

当 B 细胞或 TREM2/DAP12 受体复合物受到刺激时，PLCγ2 会与 SYK、BTK 和 BLNK（也称为 SLP-65）相互作用，通过其催化结构域 Tyr1217 位点的磷酸化而被激活。随后，PLCγ2 会将磷脂酰肌醇 4,5 - 二磷酸（PIP2）切割为二酰甘油（DAG）和肌醇 1,4,5 - 三磷酸（IP3）。IP3 会进而促进钙释放，并降解为 IP1。

这将触发多种信号通路的激活和细胞反应，包括细胞激活、增殖和存活。

规格

其他规格
应用领域
细胞信号传导
品牌
HTRF
检测方式
HTRF
分子修饰
磷酸化
产品类别
试剂盒
样品体积
16 µL
运输条件
干冰运输
靶标类别
磷酸化蛋白质
靶标物种
人
技术
时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域
神经科学
肿瘤学与炎症
单位规格
50,000 个检测点

没有数据

货号：64PLCG2Y7PEY

一键复制

参考价格 ¥ 545226.97

产品规格

请咨询￥545226.97

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价