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HTRF RSK1 P-T359 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 - RSK1（T359/S363）细胞检测试剂盒旨在通过简化的 “混合即读、无需洗涤” 流程，直接对苏氨酸 359 / 丝氨酸 363 位点的 RSK1 磷酸化水平进行精准定量。RSK1 在细胞增殖和分化中发挥关键作用。该试剂盒可应用于基础研究乃至高通量药物筛选等多个领域，其多功能性使其适用于从基础研究到细胞模型药理学问题分析等多种场景。

工作原理
磷酸化 - RSK1（T359）检测原理
磷酸化 - RSK1 检测可测定在 T359 位点发生磷酸化的 RSK1。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 RSK1 检测采用两种标记抗体：一种携带供体荧光团，另一种携带受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接相关，为在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态提供了手段。

磷酸化 - RSK1（T359）双板检测方案
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解。之后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板中，再加入 HTRF 磷酸化 - RSK1（T359）检测试剂。此方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 - RSK1（T359）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 - RSK1（T359）可在同一培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证
在表皮生长因子（EGF）刺激的 A431 细胞中检测总 RSK1 和磷酸化 RSK1（T359）
将 A431 细胞以每孔 100µl 的量接种到 96 孔板中（80,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。次日，向细胞中加入 50µl 不同浓度的 EGF，在 37°C、5% CO₂条件下处理 5 分钟。

移除培养基后，用 100µL 补充的 2 号裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟，然后将 16µL 裂解物转移至白色小体积微孔板中，再加入 2µL HTRF D2 检测试剂和 2µL HTRF Eu-K 检测试剂。在不同的孔中分别对总 RSK1 和磷酸化 - RSK1 T359 进行定量。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

简化通路
RSK1 的功能与调控
核糖体蛋白 S6 激酶 α-1（RSK1）是 MAP 激酶和 ERK 信号通路的下游组分，作为丝氨酸 / 苏氨酸激酶，参与转录因子的调控以及细胞增殖、存活和分化过程。

它首先在 MAPK1/ERK 的作用下于 Thr359/Ser363 位点发生磷酸化而被激活，随后在 Ser380 位点发生自磷酸化，这使得 PDK1 能够与之结合。

规格参数

其他规格参数
应用领域：细胞信号传导
兼容自动化操作：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白质
目标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：传染病、代谢 / 糖尿病、肿瘤与炎症、罕见病
单位规格：500 个检测点

没有数据

货号：64RSK1T9PEY

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