HTRF SMAD2 TOTAL KIT - 50K PTS

总 SMAD2 细胞检测试剂盒旨在监测 SMAD2 的表达水平，无论其处于磷酸化还是非磷酸化状态。

该试剂盒与我们的磷酸化 SMAD2 试剂盒兼容，能够从单个样本中同时分析磷酸化蛋白和总蛋白，从而更准确地反映 TGF-ß 信号活性。

总 SMAD2 检测原理

将 C2C12 细胞以每孔 50,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜后，向细胞中加入系列稀释的人 TGFβ，在 37°C、5% CO₂条件下处理 30 分钟。移除刺激培养基，向细胞中加入 50µL 裂解缓冲液。轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 样品转移至 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 磷酸化 SMAD2 HTRF 检测试剂。同时，将 16µL 样品加入其他孔中，再加入 4µL 总 SMAD2 HTRF 检测试剂。过夜后记录信号。

选择 HeLa 细胞用于测试人源兼容性，选择 NIH 3T3 和 C2C12 细胞用于测试鼠源兼容性。将这些不同模型的 100,000 个细胞接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜后，移除细胞培养基，向细胞中加入 50µL 裂解缓冲液。轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16µL 样品转移至 384 孔小体积板中，然后加入 4µL 总 SMAD2 HTRF 检测试剂。过夜后记录信号。

总 SMAD2 HTRF 检测能够检测到人源和鼠源的 SMAD2 蛋白。

将小鼠 C2C12 细胞培养至 80% 汇合度。经人 TGFβ 处理后，裂解细胞并通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 各稀释液转移至 384 孔小体积白色微孔板中，最后加入总 SMAD2 细胞检测试剂盒试剂。平行比较显示，HTRF 总蛋白检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 9 倍。

TGF-ß 信号通路