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HTRF (H) AGGREG A-SYNU P-S129 - 500 PTS

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概述

监测 α- 突触核蛋白（alpha-synuclein）的磷酸化及聚集状态，对于研究突触核蛋白病（synucleinopathies）的发病机制具有重要意义。突触核蛋白病是一组神经退行性疾病，包括帕金森病（PD）、路易体痴呆（DLB）、弥漫性路易体病（DLBD）和多系统萎缩（MSA）。本试剂盒提供了一种可在细胞培养物或脑组织提取物中快速检测并定量人 α- 突触核蛋白聚集体的解决方案。

作用原理

HTRF 人磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）聚集体检测原理

α- 突触核蛋白聚集体的检测采用夹心免疫分析法，核心是使用针对磷酸化 Ser129 位点 α- 突触核蛋白聚集体的特异性单克隆抗体 —— 该抗体分别标记铽 - 穴状化合物（terbium-Cryptate）或 d2 荧光基团，可确保检测的质量、重复性与信号稳定性。检测产生的特异性 HTRF 信号强度与 α- 突触核蛋白聚集体的含量呈正相关。

（附图标注：assay-principle-how-it-works-alpha-synuclein-aggr-phosphos129-64syn29agpeg-64syn29agpeh-64syn29agpey.svg，即 “人磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）聚集体检测原理示意图”）

HTRF 人磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）聚集体检测方案

将样本或脑组织提取物转移至检测板中，用于检测 α- 突触核蛋白聚集体。可将标记 HTRF 荧光基团的两种抗体预先混合，通过单次加样完成添加，进一步简化检测流程。该检测可在 96 孔板或 384 孔板中进行，只需按比例调整各试剂的添加体积即可。

（附图标注：assay-protocol-how-it-works-alpha-synuclein-aggr-phosphos129-64syn29agpeg-64syn29agpeh-64syn29agpey.svg，即 “人磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）聚集体检测方案流程示意图”）

检测验证

磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）聚集体检测验证

通过排阻层析（G25）纯化磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）聚集体样本，得到 3 个洗脱峰，分别对应磷酸化 α- 突触核蛋白的寡聚体、二聚体和单体。

将纯化后得到的每种样本进行 14 次系列稀释，以每孔 16 微升（μL）的体积加入小体积白色微孔板中。

向每孔加入 2 微升 HTRF d2 检测试剂和 2 微升 HTRF 铕 - 铽（Eu-Tb）检测试剂，在室温下孵育过夜后记录信号。

结果显示：检测仅对寡聚体聚集体产生显著信号；进一步观察二聚体聚集体检测情况，发现其信号强度较低但仍可检出；而单体未被检测到，这表明该检测对聚集体具有特异性。

（附图标注 1：assay-validation-alpha-synuclein-aggr-phosphos129-64syn29agpeg-64syn29agpeh-64syn29agpey-01.svg，即 “磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）不同形式检测结果图 1”；附图标注 2：assay-validation-alpha-synuclein-aggr-phosphos129-64syn29agpeg-64syn29agpeh-64syn29agpey-02.svg，即 “磷酸化 α- 突触核蛋白（Ser129）不同形式检测结果图 2”）

规格参数

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
裂解缓冲液兼容性：5 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化（针对 α- 突触核蛋白 Ser129 位点）
产品类别：试剂盒（Kit）
样本体积：16 微升（μL）
运输条件：干冰运输
靶点类别：磷酸化蛋白
靶点物种：人（Human）
技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
单位规格：500 个检测点

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货号：64SYN29AGPEG

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