HTRF MTOR P-S2448 KIT - 50K PTS

概述

工作原理

• 磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测原理
  磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测用于测量在 Ser2448 位点发生磷酸化的 mTOR。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转移步骤。磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测使用两种标记抗体：一种结合供体荧光团，另一种结合受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且提供了一种在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质磷酸化状态的方法。
• 磷酸化 - mTOR（Ser2448）双板检测方案
  双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中，之后添加磷酸化 - mTOR（Ser2448）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。
• 磷酸化 - mTOR（Ser2448）单板检测方案
  使用 HTRF 试剂检测磷酸化 - mTOR（Ser2448）可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

• 使用磷酸化 - mTOR 细胞检测进行 HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较
  将 Hek293 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。去除细胞培养基后，加入 3mL 补充的裂解缓冲液并孵育 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。使用等量的裂解物对蛋白质印迹法和 HTRF 检测进行平行比较。HTRF 检测显示出与蛋白质印迹法相同的灵敏度：两种技术均为 1560 个细胞。
• 胰岛素对 NIH 3T3 细胞的剂量反应
  将小鼠 NIH 3T3 细胞（100,000 个细胞 / 孔）用不同浓度的福司柯林在 37°C 条件下刺激 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用双板检测方案测量磷酸化 mTOR。
• 雷帕霉素对 Jurkat 细胞基础水平的抑制作用
  将 Jurkat 细胞（100,000 个细胞 / 孔）用不同浓度的抑制剂在 37°C 条件下孵育 30 分钟。裂解孵育 30 分钟后，采用单板检测方案测量磷酸化 mTOR 基础水平的抑制情况。

简化通路

• 磷酸化 - mTOR（Ser2448）检测试剂盒的简化通路
  雷帕霉素的哺乳动物靶点（mTOR）是一种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白激酶，可作为 ATP 和氨基酸传感器，在细胞生长和内稳态中发挥关键作用。由于 mTOR 在肿瘤中可能存在异常调控，目前它正作为潜在的抗癌治疗靶点被研究。mTOR 自身可通过 PI3 激酶 / Akt 信号通路在 Ser2448 位点发生磷酸化，并在 Ser2481 位点发生自磷酸化。

规格

• 应用：细胞信号传导
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF
• 分子修饰：磷酸化
• 产品类别：试剂盒
• 样品体积：16µL
• 运输条件：干冰运输
• 靶标类别：磷蛋白
• 靶标物种：
  • 人类
  • 小鼠
• 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
• 治疗领域：
  • 心血管疾病
  • 代谢 / 糖尿病
  • 非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
  • 神经科学
  • 肿瘤学与炎症
• 单位规格：50,000 个检测点