当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF (H) ULK1 TOTAL KIT - 50K PTS

HTRF (H) ULK1 TOTAL KIT - 50K PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64ULKTPEG_US rvty_ls_sds_64ULKTPEG_UK rvty_ls_sds_64ULKTPEG_SPA rvty_ls_sds_64ULKTPEG_ITA rvty_ls_sds_64ULKTPEG_ELL rvty_ls_sds_64ULKTPEG_DEU rvty_ls_sds_64ULKTPEG_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

ULK1 是一种胞质激酶，属于一个复合物，作为自噬的上游调节因子，可促进吞噬泡的形成。自噬是维持细胞内稳态的生理过程，这使得 ULK1 成为多种疾病（与衰老相关的疾病、传染病、溶酶体贮积症、神经退行性疾病或癌症）的新治疗靶点。

工作原理

HTRF 人总 ULK1 检测原理

HTRF 人总 ULK1 检测可定量细胞裂解物中 ULK1 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。人总 ULK1 检测使用两种标记抗体，一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的不同表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 ULK1 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，并且提供了一种在无需洗涤的检测格式下评估蛋白质表达的方法。

人总 ULK1 双板检测方案

双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解，再将裂解物转移到 384 孔低体积检测板中，之后添加人总 ULK1 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

人总 ULK1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测人 ULK1 可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

使用 AMPK 抑制剂在不同细胞系中抑制 ULK1 Ser556 磷酸化

将 U-87 MG 或 MCF7 细胞接种在 96 孔培养处理板中，每孔 100,000 个细胞，使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂ 条件下过夜孵育。然后，用不同浓度的 AMPK 抑制剂（BAY-3827）在 37°C、5% CO₂ 条件下处理细胞 1 小时。用 25 µL 补充的 #4 裂解缓冲液裂解细胞后，将 16 µL 裂解物转移到 384 孔低体积白色微孔板中，然后添加 4 µL HTRF 总 ULK1 检测抗体。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

正如预期的那样，我们的结果显示，经 AMPK 抑制剂处理后，Ser556 位点磷酸化的 ULK1 呈剂量依赖性降低，而总 ULK1 的表达水平没有显著变化。此外，在相同实验条件下，使用 GAPDH 管家细胞试剂盒（Revvity®，货号 64GAPDHPEG）未观察到细胞毒性作用（数据未显示）。

总 ULK1 检测的特异性

使用 HTRF 总 ULK1 试剂盒在不同的 HAP1 细胞系中评估总 ULK1 的表达水平。

HAP1 野生型（HAP1 WT）和 ULK1 敲除的 HAP1（HAP1 KO ULK1）细胞系在 T175 培养瓶中，使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂ 条件下培养。孵育 48 小时后，对于 30×10⁶ 个细胞，加入 1mL 补充的 #4 裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。

将 16 µL 每种裂解物转移到低体积白色微孔板中，然后添加 4 µL HTRF 总 ULK1 检测试剂。

使用多种人类细胞系的总 ULK1 检测的通用性

使用 HTRF 总 ULK1 试剂盒在不同细胞系（U-87 MG、MCF7、HeLa）中评估总 ULK1 的表达水平。

这些细胞系在 T175 培养瓶中，使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂ 条件下培养。孵育 48 小时后，对于 30×10⁶ 个细胞，加入 1mL 补充的 #4 裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。

将 16 µL 每种裂解物转移到低体积白色微孔板中，然后添加 4 µL HTRF 总 ULK1 检测试剂。

HTRF 总 ULK1 检测与蛋白质印迹法的比较

U-87 MG 细胞在 T175 培养瓶中，使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂ 条件下培养。孵育 48 小时后，对于 30×10⁶ 个细胞，加入 1mL 补充的 #4 裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟。

使用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 每种稀释液转移到低体积白色微孔板中，然后添加 4 µL HTRF 总 ULK1 检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的并列比较。

在这些条件下，HTRF 总 ULK1 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 2 倍。

简化通路

ULK1 信号通路

ULK1 是一种胞质激酶，属于 ULK1 复合物，该复合物包含 FIP200、Atg101 和 Atg13。ULK 复合物的激活促进吞噬泡的形成和自噬的启动。

ULK1 复合物受到 mTORC1 的负调控，而 AMPK 介导其激活。mTORC1 通过直接磷酸化 ULK1 上的 Ser758 来抑制 ULK1 复合物。在营养饥饿条件下，AMPK 通过磷酸化 Ser317 和 Ser556 激活 ULK1，或通过抑制 mTORC1 来促进自噬。

ULK1 复合物被认为是自噬的上游枢纽，自噬是维持细胞内稳态的生理过程。这使得 ULK1 成为治疗靶点，特别是在癌症治疗中。例如，抑制 ULK1 可诱导非小细胞肺癌（NSCLC）细胞凋亡。

规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 个检测点

没有数据

货号：64ULKTPEY

一键复制

参考价格 ¥ 545226.97

产品规格

请咨询￥545226.97

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价