HTRF VEGFR2 TOTAL KIT - 500 PTS

概述

用于监测总VEGFR2调控的均相细胞检测法。VEGFR2介导的信号数据可用于血管生成、血管通透性和癌症干细胞调控研究。工作原理

总VEGFR2检测原理 总VEGFR2检测可对VEGFR2进行定量分析。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总VEGFR2检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生FRET信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用免洗格式，为评估蛋白质的磷酸化状态提供了一种便捷方式。 磷酸化平板检测方案 总VEGFR2双板检测方案 双板方案的流程为：先在96孔板中培养细胞，然后进行裂解，接着将裂解物转移至384孔小体积检测板，之后再加入总VEGFR2 HTRF检测试剂。通过该方案能够监测细胞的活力和汇合度。 磷酸化检测工作原理 总VEGFR2单板检测方案 使用HTRF试剂检测总VEGFR2可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，且无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现实验微型化，同时保持稳定的HTRF检测质量。 磷酸化总FGFR检测验证

胰岛素对人脐静脉内皮细胞（Huvec）的磷酸化和总VEGFR2检测的剂量反应效应 将Huvec细胞以每孔150,000个细胞的密度接种到96孔板中。在37°C、5% CO₂条件下过夜培养后，向细胞中加入一系列稀释的人血管内皮生长因子（VEGF），并在37°C、5% CO₂条件下孵育3分钟。移除刺激培养基，加入50µL裂解缓冲液。进行裂解步骤，轻轻振荡30分钟。将16µL样品转移至384孔小体积板中，然后加入4µL磷酸化VEGFR2 HTRF检测试剂。同时，将16µL样品分装到其他孔中，再加入4µL HTRF总VEGFR2检测试剂。信号记录持续过夜。 检测验证 与总VEGFR2检测的蛋白质印迹法比较 将人Huvec细胞培养至80%汇合度。用hVEGF处理3分钟后，裂解细胞，通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解物进行系列稀释，将每一种稀释液各16µL转移至384孔小体积白色微孔板中，最后加入VEGFR2细胞检测试剂盒的检测试剂。 对比结果显示，HTRF总检测法的灵敏度至少是蛋白质印迹法的32倍。 检测验证 简化通路 血管内皮生长因子（VEGF）是一种内皮细胞特异性有丝分裂因子，常与肿瘤诱导的血管生成激活相关。在肿瘤中，VEGF的分泌会上调。在 endothelial细胞表面，分泌的VEGF蛋白可高亲和力结合至少两种不同的血管内皮生长因子受体（VEGFRs），即VEGFR-1（也称为fms样酪氨酸激酶，Flt-1）和VEGFR-2（也称为胎儿肝激酶，Flk-1）。 VEGF激活内皮细胞后，会导致受体自身磷酸化并启动后续信号传导。目前已发现多个磷酸化位点。 VEGFR与血管生成有关，联合抑制VEGF和PDGF信号可促进肿瘤血管消退。 磷酸化通路规格

其他规格 应用 细胞信号传导 品牌 HTRF 检测方式 HTRF 裂解缓冲液兼容性 裂解缓冲液1 裂解缓冲液2 裂解缓冲液4 裂解缓冲液5 分子修饰 总（蛋白） 产品类别 试剂盒 样品体积 16 µL 运输条件 干冰运输 靶标类别 磷酸化蛋白 靶标物种 人 技术 时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） 治疗领域 心血管疾病 非酒精性脂肪性肝炎/肝纤维化 神经科学 肿瘤学与炎症 单位规格 500个检测点