当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF ZAP-70 TOTAL KIT - 500 PTS

HTRF ZAP-70 TOTAL KIT - 500 PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64ZATPEG_US rvty_ls_sds_64ZATPEG_UK rvty_ls_sds_64ZATPEG_SPA rvty_ls_sds_64ZATPEG_ITA rvty_ls_sds_64ZATPEG_ELL rvty_ls_sds_64ZATPEG_DEU rvty_ls_sds_64ZATPEG_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

总 ZAP-70 细胞检测试剂盒旨在监测 ZAP-70 蛋白的表达水平，包括磷酸化和非磷酸化形式。该试剂盒与我们的磷酸化 ZAP-70 试剂盒兼容，能够从单个样本中同时分析磷酸化蛋白和总蛋白，从而更好地反映 T 细胞的活化情况。ZAP-70 是一种在 T 细胞和自然杀伤（NK）细胞中表达的胞质蛋白酪氨酸激酶，在抗原受体启动 T 细胞应答的过程中发挥关键作用。

工作原理

总 ZAP-70 检测原理

总 ZAP-70 检测可对细胞裂解物中 ZAP-70 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 ZAP-70 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 ZAP-70 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样本中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的形式，为评估蛋白质表达提供了便捷方式。

总 ZAP-70 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入总 ZAP-70 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

总 ZAP-70 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 ZAP-70 可在单个平板中完成，该平板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

基于人 Jurkat 细胞的 ZAP-70 细胞检测中 HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较

Jurkat 细胞在添加 10% 胎牛血清（FBS）的 RPMI 培养基中，于 37°C、5% CO₂环境下的 T175cm² 培养瓶中培养 2 天。取 4.5 mL 细胞悬液（13×10⁶个细胞 /mL），用抗 CD3 抗体（终浓度 20 µg/mL）刺激 2.5 分钟。刺激后，加入 2.25 mL 4 倍浓度的补充裂解缓冲液，在室温下裂解细胞 30 分钟。然后将纯裂解物用相同的补充裂解缓冲液进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液分别通过 HTRF 检测和蛋白质印迹法进行平行分析。

细胞刺激动力学 —— 总 ZAP-70 检测

本检测采用双板检测方案。将 Jurkat 细胞以 40 万个 / 孔的密度接种到 96 孔培养板中，每孔加入 25 µL 含 10% FBS 的完全 RPMI 培养基。使用终浓度为 20 µg/mL 的抗 CD3 抗体对细胞进行不同时间（分钟）的刺激。刺激后，加入 10 µL 4 倍浓度的补充裂解缓冲液裂解细胞。取 16 µL 各类型细胞裂解物，用 HTRF 总 ZAP-70 检测试剂盒进行分析。

免疫检查点抑制剂 PD-L1 活性的监测

由于磷酸化 ZAP-70（Tyr319）可作为 T 细胞活化的指标，因此可用于监测 PD-L1 重组蛋白对 T 细胞活化的抑制作用。本检测采用双板检测方案：将 40 万个 Jurkat 细胞接种到 96 孔培养板中，每孔加入 25 µL 含 10% FBS 的完全 RPMI 培养基；将细胞与不同浓度的 PD-L1 重组蛋白预孵育 24 小时；然后用终浓度为 20 µg/mL 的抗 CD3 抗体刺激细胞 2.5 分钟，直接加入 10 µL 4 倍浓度的补充裂解缓冲液裂解细胞，并在室温下孵育 30 分钟；取 16 µL 各样本，分别用磷酸化 ZAP-70（Tyr319）检测试剂盒和总 ZAP-70 检测试剂盒进行分析。将磷酸化 ZAP-70 的检测结果以总 ZAP-70 的量进行归一化处理，并绘制图表。结果显示，当 PD-L1 重组蛋白的终浓度为 40 µg/mL 时，磷酸化 ZAP-70（Tyr319）检测记录到其具有轻微但显著的抑制作用。

简化通路

ZAP-70 的功能与调控

T 细胞受体（TCR）的激活会促使淋巴细胞蛋白酪氨酸激酶（Lck）磷酸化 TCR/CD3 复合物胞质侧的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAMs）。ZAP-70 被招募到 TCR/CD3 复合物上并发生磷酸化和活化，进而促进下游衔接蛋白或支架蛋白的招募和磷酸化。

规格参数

其他规格：无特殊说明
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4、裂解缓冲液 5
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样本体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：500 次检测

没有数据

货号：64ZATPEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

请咨询￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价