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HTRF H2AX P-S139 KIT - 10K PTS 磷酸化组蛋白H2AX测量试剂盒 - 10，000测试

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概述

磷酸化 H2AX（Ser139）试剂盒可对丝氨酸 139 位点磷酸化的组蛋白变体 H2AX 进行定量检测。当双链 DNA 断裂时（无论是由电离辐射还是内源性生理过程引起），可能会发生这种特异性磷酸化。这种被称为 γ-H2AX（磷酸化 Ser139）的修饰会触发细胞周期停滞和 DNA 损伤反应修复，因此该检测特别适用于研究基因组稳定性、细胞周期、DNA 修复，更广泛地说，还可作为癌症和衰老过程研究的生物标志物。

工作原理

磷酸化 H2AX（Ser139）检测原理

磷酸化 H2AX（Ser139）检测用于测定在 Ser139 位点发生磷酸化的 H2AX。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 H2AX（Ser139）检测使用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质的磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号的强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

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磷酸化 H2AX（Ser139）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 H2AX（Ser139）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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磷酸化 H2AX（Ser139）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 H2AX（Ser139）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中进行，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

HTRF 磷酸化 H2AX 细胞检测与蛋白质印迹法的比较

将 HEK-293 细胞在 T175 培养瓶中培养至 80% 汇合度。然后裂解细胞培养物并通过离心沉淀。在补充的裂解缓冲液中对细胞裂解物进行系列稀释，分装 16 µL 各稀释液，通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。结果发现，HTRF 细胞检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 16 倍。

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新制癌菌素对 Jurkat 细胞的剂量反应

将 25,000 个人 Jurkat 细胞接种到 96 孔板中。用浓度递增的新制癌菌素孵育 30 分钟后，用 10 µL 4X 裂解缓冲液在室温下轻轻摇晃裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化 H2AX（Ser139）检测试剂。室温下过夜孵育后记录 HTRF 信号。

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Jurkat 细胞中磷酸化 H2AX（Ser139）的激活：检测动力学

将 25,000 个人 Jurkat 细胞接种到 96 孔板中。用浓度递增的新制癌菌素孵育 30 分钟后，用 10 µL 4X 裂解缓冲液在室温下轻轻摇晃裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化 H2AX（Ser139）检测试剂。在不同孵育时间后记录 HTRF 信号。

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简化通路

磷酸化 H2AX（Ser139）细胞检测试剂盒简化通路

DNA 双链断裂（DSB）是最有害的 DNA 损伤类型，由内源性过程或外源性因素（如电离辐射、紫外线辐射、特定抗癌药物）引起。H2AX 是组蛋白 H2A 家族的一种变体，在发生双链断裂时，其 Ser139 位点会发生磷酸化。这种修饰被称为 γ-H2AX，在几分钟内会扩散到损伤部位附近的数千个 H2AX 蛋白上。这对于激活 DNA 损伤反应通路（一种检测和修复 DNA 损伤的复杂分子机制）至关重要。

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规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容的裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64H2XPEH

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