当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > ALPHA.SF ULTRA SRC PY419, LYSATE

ALPHA.SF ULTRA SRC PY419, LYSATE

分享给好友

下载产品资料

下载SDS

Surefire Ultra _Activation Buffer SDS_(EU)v1.1 (115) Surefire Ultra _Activation Buffer SDS_(USA)v1.0 (115)

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

这种对照裂解液适用于 AlphaLISA SureFire Ultra 磷酸化 Src 检测试剂盒，也可作为那些在进行 SureFire 检测的同时开展正交检测或二次检测的实验的对照样本。为制备该裂解液，将 HeLa 细胞在含有 10% 胎牛血清（FBS）的培养基中于 T175 培养瓶内培养至汇合状态，然后用 2.5% 的过钒酸钠处理 30 分钟，最后用 4 毫升的 1 倍浓度的 SureFire Ultra 裂解缓冲液进行裂解。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
自动化兼容性：支持自动化操作
品牌：AlphaLISA SureFire Ultra
检测方式：Alpha
裂解缓冲液兼容性：与裂解缓冲液兼容
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：对照裂解液
运输条件：采用蓝冰运输
靶标：Src
靶标类别：磷酸化蛋白质
靶标物种：人类
技术：Alpha
单位规格：1 瓶

没有数据

货号：ALSU-PSRC-A-L

一键复制

参考价格 ¥ 2405.19

产品规格

请咨询￥2405.19

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价

相关产品推荐

3 种 CREBBP/p300 PROTAC 的剂量效应和时间进程研究

三种 PROTAC 均诱导 CREBBP 和 p300 的剂量依赖性降解，而弹头 GNE-781 则无此作用。这些化合物对两种蛋白的作用相似（如效力和动力学）。两种处理时间后，三种降解剂的效力排名相同，其中沙利度胺 - NH-CBP/P300 配体 2 的效力分别是 PROTAC CBP/p300 Degrader-1 的 4 倍和 dCBP-1 的 10 倍（基于 DC50 值）。处理 20 小时后，PROTAC CBP/p300 Degrader-1 和 dCBP-1 的效力显著提高（2.5 至 5 倍），沙利度胺 - NH-CBP/P300 配体 2 的降解效率也从 65% 提高到 80%。值得注意的是，即使处理 20 小时，这些化合物也未诱导明显的细胞毒性作用（ATPlite 1step 检测，数据未显示）。

总 CREBBP 和总 p300 检测特异性的验证

将 HeLa 细胞接种到 96 孔培养板中（总 CREBBP 检测为 50,000 个细胞 / 孔，总 p300 检测为 12,500 个细胞 / 孔），使用完全培养基，在 37°C、5% CO₂条件下培养过夜。次日，用针对人 CREBBP 或其同源物人 p300 的 ON-TARGETplus SMARTPool siRNA 转染细胞，同时使用非靶向 siRNA 作为阴性对照。用 siRNA 孵育 24 小时后，更换培养基再孵育 24 小时，然后用 50 µL 补充的 1 号裂解缓冲液裂解细胞。细胞裂解后，如第一部分所述，使用相应的 HTRF 试剂盒检测总 CREBBP 和总 p300，并使用 ATPlite 1step 发光试剂盒测量细胞活力。

siRNA 实验表明，HTRF 总 CREBBP 和总 p300 试剂盒均能特异性检测目标蛋白，而不会识别该家族的另一个成员。用 CREBBP siRNA 处理使总 CREBBP 检测的信号降低 70%，而敲低 p300 并未导致该检测的信号降低。相反，用 p300 siRNA 处理使总 p300 检测的信号降低 86%，而沉默 CREBBP 基因并未导致该检测的信号降低。在 CREBBP 和 p300 siRNA 存在的情况下，ATPlite 发光信号保持稳定，表明 HTRF 信号的降低与细胞毒性作用无关。

不同人源和鼠源细胞系中总 CREBBP 水平的评估

实验采用贴壁细胞的双板检测方案进行。将人源细胞系 SH-SY5Y、MCF7、HeLa、A431 和 A549，以及鼠源细胞系 NIH-3T3 和 Neuro-2a 接种到 96 孔培养板中（100,000 个细胞 / 孔，使用完全培养基），在 37°C、5% CO₂条件下培养 24 小时。次日，用 50 µL 补充的 1 号裂解缓冲液裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移至小体积白色微孔板（ProxiPlate-384 Plus，货号 6008280/9）中，再加入 4 µL HTRF 总 CREBBP 试剂盒检测抗体。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

HTRF 总 CREBBP 检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将 HeLa 细胞接种到 T175 培养瓶中，在含完全培养基的条件下于 37°C、5% CO₂环境中培养，直至汇合度达到约 90%。用 3 mL 补充的 1 号裂解缓冲液裂解细胞，并用补充的裂解缓冲液对裂解物进行系列稀释。为检测总 CREBBP，将 16 µL 各稀释液转移至小体积白色微孔板（ProxiPlate-384 Plus，货号 6008280/9）中，并加入 4 µL HTRF 总 CREBBP 检测试剂。取等量裂解物进行蛋白质印迹法检测，与 HTRF 检测进行平行比较。

简化通路

CREBBP/p300 信号通路

CREBBP 和 p300 是许多由细胞内或细胞外信号激活的重要信号通路的核心。它们调节生长因子和激素信号传导，如由核激素受体 AR（雄激素受体）和 ER（雌激素受体）介导的信号传导。其他信号示例包括缺氧、细胞应激（涉及 MAP 激酶 p38、JNK 和 ERK）、高血糖、GPCR 激动剂（诱导 cAMP 信号传导）和细胞因子（由 JAK/STAT 通路介导）。CREBBP/p300 还调节 TLR/IRF-3 通路，以控制先天免疫应答。CREBBP 和 p300 均是 BRD4 占据位点（如 H3K27ac）的组蛋白乙酰化所必需的，也是 BRD4 结合到基因启动子和增强子以调节相关基因转录所必需的。