本试剂盒基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术,包含用于定量环磷酸腺苷(cAMP)所需的全部试剂,可为您提供满足实验需求的完整工具,助力您的研究工作。
瑞孚迪(Revvity)的 HTRF 环磷酸腺苷(cAMP)试剂盒经过优化,兼具稳定性与灵敏度,最适用于检测 G 蛋白偶联受体(Gs)激活后环磷酸腺苷(cAMP)的水平变化。
环磷酸腺苷(cAMP)试剂盒采用竞争结合法设计,包含两种关键成分:一是标记有穴状化合物(供体)的特异性抗体,二是与 d2 荧光团(受体)偶联的环磷酸腺苷(cAMP)。该设计可直接分析作用于 Gs 偶联受体的各类化合物,适用于贴壁细胞与悬浮细胞两种细胞模型。细胞自身产生的内源性环磷酸腺苷(cAMP)会与 d2 标记的环磷酸腺苷(cAMP)竞争结合抗 cAMP 铕(Eu³⁺)穴状化合物单克隆抗体。
G 蛋白偶联受体(GPCR)工作原理:检测原理(环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白 - 动态过程,编号 62am4peb)
本试剂盒的检测流程简单直观,仅需两步孵育操作:
- 目标化合物刺激细胞
- 使用 HTRF 试剂检测环磷酸腺苷(cAMP)水平
G 蛋白偶联受体(GPCR)工作原理:检测流程(环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白 - 动态过程,编号 62am4peb)
本试剂盒经过优化,可用于研究各类高难度、高价值的细胞模型。其设计旨在以最少的细胞消耗量获得实验结果,且具有极低的纳摩尔(nM)级半数抑制浓度(IC50)。
半数抑制浓度(IC50)左移可实现对更低浓度环磷酸腺苷(cAMP)的定量分析,大幅减少实验所需的细胞数量。
对表达内源性 β2 肾上腺素能受体的人胚肾 293(HEK293)细胞,用异丙肾上腺素(激动剂)处理 45 分钟。
异丙肾上腺素的作用特征明确,其效价与文献报道高度一致,符合实验预期。
环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白动态检测验证 1
将人胚肾 293(HEK293)细胞以每孔 7500 个细胞的密度接种(该细胞浓度处于试剂盒的动态检测范围内,为最适浓度),并用系列浓度的异丙肾上腺素(β2 肾上腺素能受体完全激动剂)处理。
通过测定 80%-90% 有效浓度(EC80-EC90),确定拮抗剂实验模式中所用激动剂的最适浓度。
对拮抗剂进行系列稀释并拟合曲线,可计算出各化合物的半数抑制浓度(IC50,即效价),该结果与文献报道完全吻合。
环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白动态检测验证 2