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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Second messengers > HTRF CAMP GS DYNAMIC KIT - 100K PTS 环腺苷酸测量试剂盒-100,000测试

概述

本试剂盒基于均相时间分辨荧光(HTRF)技术,包含用于定量环磷酸腺苷(cAMP)所需的全部试剂,可为您提供满足实验需求的完整工具,助力您的研究工作。


瑞孚迪(Revvity)的 HTRF 环磷酸腺苷(cAMP)试剂盒经过优化,兼具稳定性与灵敏度,最适用于检测 G 蛋白偶联受体(Gs)激活后环磷酸腺苷(cAMP)的水平变化。

工作原理

检测原理

环磷酸腺苷(cAMP)试剂盒采用竞争结合法设计,包含两种关键成分:一是标记有穴状化合物(供体)的特异性抗体,二是与 d2 荧光团(受体)偶联的环磷酸腺苷(cAMP)。该设计可直接分析作用于 Gs 偶联受体的各类化合物,适用于贴壁细胞与悬浮细胞两种细胞模型。细胞自身产生的内源性环磷酸腺苷(cAMP)会与 d2 标记的环磷酸腺苷(cAMP)竞争结合抗 cAMP 铕(Eu³⁺)穴状化合物单克隆抗体。


G 蛋白偶联受体(GPCR)工作原理:检测原理(环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白 - 动态过程,编号 62am4peb)

检测流程

本试剂盒的检测流程简单直观,仅需两步孵育操作:


  1. 目标化合物刺激细胞
  2. 使用 HTRF 试剂检测环磷酸腺苷(cAMP)水平


G 蛋白偶联受体(GPCR)工作原理:检测流程(环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白 - 动态过程,编号 62am4peb)

检测详情

环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白动态检测产品规格

本试剂盒经过优化,可用于研究各类高难度、高价值的细胞模型。其设计旨在以最少的细胞消耗量获得实验结果,且具有极低的纳摩尔(nM)级半数抑制浓度(IC50)。


半数抑制浓度(IC50)左移可实现对更低浓度环磷酸腺苷(cAMP)的定量分析,大幅减少实验所需的细胞数量。

环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白检测规格表 1

检测类型信号背景比(S/B)20% 抑制浓度(IC20,nM)半数抑制浓度(IC50,nM)80% 抑制浓度(IC80,nM)
环磷酸腺苷 - Gs 蛋白动态检测>140.914.0718.1
环磷酸腺苷 - Gs 蛋白高量程检测>284.2722.8121

检测验证

激动剂剂量反应验证

对表达内源性 β2 肾上腺素能受体的人胚肾 293(HEK293)细胞,用异丙肾上腺素(激动剂)处理 45 分钟。


异丙肾上腺素的作用特征明确,其效价与文献报道高度一致,符合实验预期。


环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白动态检测验证 1

拮抗剂剂量反应验证

将人胚肾 293(HEK293)细胞以每孔 7500 个细胞的密度接种(该细胞浓度处于试剂盒的动态检测范围内,为最适浓度),并用系列浓度的异丙肾上腺素(β2 肾上腺素能受体完全激动剂)处理。


通过测定 80%-90% 有效浓度(EC80-EC90),确定拮抗剂实验模式中所用激动剂的最适浓度。


对拮抗剂进行系列稀释并拟合曲线,可计算出各化合物的半数抑制浓度(IC50,即效价),该结果与文献报道完全吻合。


环磷酸腺苷(cAMP)-Gs 蛋白动态检测验证 2

规格参数

其他规格

类别详情
应用领域(Application)第二信使检测(Second Messenger Detection)
品牌(Brand)HTRF
检测方式(Detection Modality)均相时间分辨荧光(HTRF,Homogeneous Time-Resolved Fluorescence)
产品类别(Product Group)试剂盒(Kit)
样本体积(Sample Volume)10 微升(10 µL)
运输条件(Shipping Conditions)常温运输(Shipped Ambient)
目标类别(Target Class)G 蛋白偶联受体(GPCR,G Protein-Coupled Receptor)
技术(Technology)时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET,Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer)
治疗领域(Therapeutic Area)心血管疾病(Cardiovascular)、感染性疾病(Infectious Diseases)、代谢 / 糖尿病(Metabolism/Diabetes)、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化(NASH/Fibrosis)、神经科学(Neuroscience)、肿瘤与炎症(Oncology & Inflammation)、罕见病(Rare Diseases)
单位规格(Unit Size)100,000 个检测点(100,000 assay points)


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