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HTRF AP2 TOTAL KIT - 20K PTS

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概述

总 AP2 细胞检测可监测总 AP2β，用于检测各类细胞中内源性或过表达的 AP2β 的表达情况。AP2β 是衔接蛋白复合体 2（AP-2）的组成部分，已知其作为货物蛋白发挥作用。它们在细胞中扮演多种角色，包括通过与 β- 抑制蛋白直接相互作用，经由网格蛋白依赖的内吞过程实现 G 蛋白偶联受体（GPCRs）的内化。AP2β 功能的改变会导致细胞对激素、神经递质或感觉信号等刺激的反应出现特异性减弱。由于 AP2 在多种组织中表达，因此人们认为 AP2 可能通过影响受体介导的信号传导，在多种癌症或其他人类疾病（如糖尿病）中发挥重要作用。

工作原理
总 AP2 检测原理
总 AP2 检测用于定量细胞裂解物中 AP2β 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 AP2 检测使用两种标记抗体，一种偶联有供体荧光团，另一种偶联有受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 AP2 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。其信号强度与样品中该蛋白的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测形式中评估蛋白质表达的方法。

总 AP2 双板检测方案
使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂检测总 AP2 可在单个培养板中进行，该培养板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

总 AP2 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 AP2 可在单个培养板中进行，该培养板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为 HTS 设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证
HTRF 总 AP2 检测与蛋白质印迹法的比较
将 HEK293 细胞在含完全培养基的 T175 培养瓶中培养，温度为 37°C、CO₂浓度为 5%。孵育 72 小时后，用 3mL 的 4# 裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。使用裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 13µL 各稀释液转移至低容量白色微孔板中，然后加入 3µL 裂解缓冲液 + 4µL HTRF 总 AP2 检测试剂。使用等量的裂解物对 HTRF 检测和蛋白质印迹法进行平行比较。蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较表明，至少在这些实验条件下，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。

HTRF 总 AP2 检测的物种兼容性
将人源（HEK293）、仓鼠源（CHO-K1）和鼠源（NIH3T3）细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板的细胞培养基中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。然后移除培养基，用 50µL 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16µL 裂解物转移至 384 孔白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 总 AP2 检测试剂。在室温下孵育 3 小时后记录 HTRF 信号。表达水平与文献数据以及用与 HTRF 检测相同的细胞进行的 qPCR 实验数据高度相关。

简化通路
GPCR 信号传导的简化通路及 AP2 的作用
β- 抑制蛋白通过调节激动剂介导的 GPCR 信号传导，在 GPCR 信号通路中发挥核心作用。在 β- 抑制蛋白的诸多功能中，它们既介导受体脱敏和再敏化过程，又作为 MAPK 通路（如 MAPK1/3 或 AKT1）的信号支架，还参与泛素 - 蛋白连接酶向受体的募集。β- 抑制蛋白作为多价衔接蛋白，可将 GPCR 从 G 蛋白信号模式（从质膜传递短期信号）转换为 β- 抑制蛋白信号模式，后者在受体内化并通过细胞内区室时启动一系列不同的信号。

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：心血管疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化
单位规格：20,000 个检测点

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货号：64AP2TPEC

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