概述
已知 G 蛋白偶联受体(GPCR)Gq 的刺激会诱导磷脂酶 C(PLC)活化,并触发肌醇磷酸(IP)级联反应。
IP1 是 IP3 的下游代谢产物,在 Gq 受体活化后会在细胞内积累,且在氯化锂(LiCl)存在时保持稳定,这使其成为理想的 GPCR(Gq)功能测定指标。
Revvity 公司开发了基于单克隆抗体的 IP-One ELISA 试剂盒,可实现对 IP1 的简便且高精度检测。
工作原理
检测原理
IP-One ELISA 是一种竞争性免疫测定方法,使用 IP1 - 辣根过氧化物酶(IP1-HRP)和抗 IP1 单克隆抗体。该试剂盒配备预包被抗小鼠抗体的 96 孔微孔板。细胞在 LiCl 存在的条件下受到刺激,受体活化后会导致 IP1 积累。细胞刺激后的实验流程包括两个步骤:加入 ELISA 组分和加入 HRP 底物 TMB。终止 HRP 反应后,在 450nm 处读取光密度(OD)值。
检测详情
规格参数
IP1 作为 IP3 的下游代谢产物,在 Gq 受体活化后会在细胞内积累。
它在 LiCl 存在时保持稳定,是 GPCR(Gq)功能测定的理想指标。
- 检测限:10nM
- 动态范围:10-3000nM
- 半最大效应浓度(EC50):110nM
- 特异性:与 50μM 肌醇、PIP2、IP2、IP3、IP4 或 PIP3 无交叉反应
检测验证
检测性能
Cisbio IP-One ELISA 试剂盒与细胞裂解物兼容,可用于活细胞功能测定。
在进行 IP-One ELISA 检测步骤之前,可采用多种板型对细胞进行刺激。
本图显示了对在 24 孔板或 96 孔板中刺激的细胞进行 IP-One ELISA 检测的结果。细胞经裂解后转移至试剂盒提供的 ELISA 板中。在 96 孔板中,每孔使用 80,000 个细胞;在 24 孔板中,每孔使用 400,000 个细胞。
两种细胞刺激形式的检测结果相似,且标准差较低。
- 应用:第二信使检测
- 检测方式:ELISA
- 动态范围:10-3,000nM
- 检测限:10nM
- 产品类别:试剂盒
- 样本体积:50μL
- 运输条件:常温运输
- 靶标类别:G 蛋白偶联受体(GPCR)
- 技术:ELISA
- 治疗领域:心血管疾病、感染性疾病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
- 单位规格:480 个检测点