核心结论

胰岛素高量程（High Range）检测试剂盒是基于 HTRF 技术的夹心免疫分析工具，具备 4 个数量级的宽动态范围，无需洗涤步骤，可大幅减少高浓度样本的稀释需求、提升定量准确性，适用于人、小鼠、大鼠等物种的胰岛素定量检测，操作简便且结果可靠，是代谢 / 糖尿病相关研究的理想工具。

产品概述

高浓度样本在胰岛素定量检测前通常需要进行稀释处理，而本 HTRF 高量程胰岛素试剂盒凭借无洗涤步骤的均相检测方案和 4 个数量级的宽动态范围，成功实现 “减少样本稀释、提高检测准确性” 的核心优势，为胰岛素的直接、可靠定量提供了简便高效的解决方案。

工作原理

检测原理

采用夹心免疫分析技术定量胰岛素：两种单克隆抗体分别标记 Cryptate（供体）和 XL665（受体），样本中胰岛素会与两种抗体特异性结合形成夹心复合物，产生的荧光共振能量转移（FRET）信号强度与胰岛素浓度呈正比，直接反映样本中目标蛋白含量。（标注：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-insulin-high-range-62in1peg-62in1peh.svg 为图表标识，对应 “胰岛素高量程检测原理”）

检测流程

1. 取 5 µL 细胞上清液加入检测板；
2. 加入 50 µL 受体标记抗体和 25 µL 供体标记抗体（或直接加入 75 µL 预混试剂，实现单次加样）；
3. 室温孵育 4 小时至过夜；
4. 用 HTRF 兼容读板仪读取检测结果。

（标注：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-insulin-high-range-62in1peg-62in1peh.svg 为图表标识，对应 “胰岛素高量程检测方案”）

数据分析

推荐使用 4 参数逻辑（4PL）曲线拟合标准曲线，适配宽动态范围的定量需求，能准确量化不同浓度梯度的胰岛素样本。Revvity 与Myassays.com合作提供数据分析支持，可通过对应链接获取免费在线胰岛素分析软件。

检测详情

技术规格

• 样本量：5 µL
• 最终检测体积：80 µL（5 µL 样本 + 50 µL 受体抗体 + 25 µL 供体抗体 / 75 µL 预混试剂）
• 试剂盒组分：含标记抗体、标准品、缓冲液及实验方案（按同类试剂盒常规配置）
• 动态范围：4 个数量级（High Range）
• 检测方式：均相夹心免疫分析，无洗涤步骤
• 适用样本：细胞上清液、胰腺组织分泌物、灌流液、细胞裂解液等

核心性能优势

与主流放射免疫分析（RIA）的相关性

在人胰腺胰岛上清液样本中，该试剂盒与主流 RIA 检测结果呈现优异相关性，回归曲线斜率为 0.9，接近理想拟合线，充分验证了检测结果的可靠性。（标注：3-1-specifications-insulin-high-range-1.svg 为图表标识，对应 “胰岛素检测与 RIA 相关性验证”）

检测验证

1. 小鼠和大鼠 β 细胞验证

• 实验流程：MIN6 小鼠 β 细胞和 INS-1E 大鼠 β 细胞以 4×10⁵个 / 孔接种到 24 孔板（500 µL 培养基 / 孔），在 37℃、5% CO₂条件下培养 6 天；刺激前用 KRB 缓冲液洗涤，在无葡萄糖的 KRB 缓冲液中静置 2 小时诱导细胞静息；加入含梯度浓度葡萄糖的 250 µL KRB 缓冲液刺激，MIN6 细胞分别培养 10 分钟和 30 分钟，INS-1E 细胞培养 2 小时后收集上清液，用 HTRF 试剂定量胰岛素；每个处理条件设三联重复（误差线为标准误 SEM）。
• 样本来源：法国蒙彼利埃 IGF 胰腺 β 细胞病理生理学研究团队（S. Dalle 和 M. Ravier 团队）

（标注：4-1assay-validation-insulin-high-range-1.svg、5-1assay-validation-insulin-high-range-2.svg 为图表标识，分别对应 “MIN6 小鼠 β 细胞胰岛素分泌验证”“INS-1E 大鼠 β 细胞胰岛素分泌验证”）

2. 大鼠胰腺胰岛验证

• 实验流程：从雄性 Wistar 大鼠中新鲜分离胰腺胰岛，在含 2.8 mM 葡萄糖（基础非刺激条件）或 8.3 mM 葡萄糖（刺激条件）的 KRB 缓冲液中 37℃孵育 30 分钟（每管 5 个胰岛，每个条件 4 管）；孵育结束后收集上清液，用胰岛素高量程试剂盒定量胰岛素浓度。
• 样本来源：法国蒙彼利埃大学药学院 Max Mousseron 生物分子研究所（IBMM）糖尿病药理学实验室

（标注：6-1assay-validation-insulin-high-range-3.svg 为图表标识，对应 “大鼠胰腺胰岛胰岛素分泌验证”）

3. 大鼠离体灌流胰腺验证

• 实验流程：分离雄性 Wistar 大鼠胰腺，用含 1.5 g/L 葡萄糖（±10 µM 槲皮素）的 KRB 缓冲液灌流；培养基持续通入 95% O₂+5% CO₂混合气体，维持温度 37.5℃，通过恒定压力控制灌流速度在 2.5–3.3 mL / 分钟；按时间梯度收集 13 份流出液，用试剂盒定量胰岛素浓度。
• 样本来源：法国蒙彼利埃大学药学院 Max Mousseron 生物分子研究所（IBMM）糖尿病药理学实验室

（标注：7-1assay-validation-insulin-high-range-4.svg 为图表标识，对应 “大鼠离体灌流胰腺胰岛素分泌验证”）

4. 人胰腺胰岛验证

• 实验流程：取 3 个人类胰腺（A、B、C）的胰岛，以 50 个胰岛 / 孔接种到 24 孔板（每个条件 3 孔），在含 2.8 mM 葡萄糖的 KRBH 缓冲液中 37℃预孵育 1 小时；延长孵育 1 小时后收集上清液，测定基础胰岛素分泌量；随后用含 16.7 mM 葡萄糖的缓冲液刺激 1 小时，收集上清液测定葡萄糖刺激后的胰岛素分泌量；最后用酸 - 乙醇溶液裂解胰岛 24 小时，离心收集裂解液，分别定量上清液和裂解液中的胰岛素浓度。
• 样本来源：法国蒙彼利埃大学医院再生医学与生物治疗研究所（IRMB）糖尿病细胞治疗实验室

（标注：8-1assay-validation-insulin-high-range-5.svg 为图表标识，对应 “人胰腺胰岛胰岛素分泌验证”）

产品规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：Kit（试剂盒）
• 样本体积：5 µL
• 运输条件：常温运输（Shipped Ambient）
• 靶标类别：Biomarkers（生物标志物）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：Metabolism/Diabetes（代谢 / 糖尿病）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）