HTRF KRAS G12C/SOS1 PPI KIT - 10K PTS

产品概述

一种快速简便的方法，用于识别KRAS G12C/SOS1蛋白相互作用的新型抑制剂。

KRAS是一种小GTP酶，参与细胞增殖、细胞存活和细胞代谢等多种生物学过程。这一原癌基因已知在多种癌症亚型中发生突变，导致细胞增殖失控和细胞代谢改变，从而促进癌细胞的Warburg效应。与大多数小GTP酶类似，KRAS在其非活性状态下结合GDP，或在转换为活性状态时结合GTP。KRAS G12C是癌症中最常见的突变形式之一，可导致KRAS处于持续激活状态。Ras鸟嘌呤核苷酸交换因子，即SOS1，是一种促进KRAS活性形式的GEF蛋白。KRAS/SOS1相互作用的上调可导致癌症表型的产生。因此，识别新型KRAS/SOS1抑制剂或GTP竞争物，通过降低KRAS活性及其相关通路活性，成为控制癌症生长相关生物学过程的两大主要策略。

工作原理

检测原理
KRAS G12C/SOS1 PPI检测试剂盒包含带标签的人源重组配对蛋白（KRAS G12C和SOS1）以及用于HTRF检测的标记抗标签试剂。在无抑制剂的情况下，装载GTP的KRAS G12C与SOS1结合，各检测试剂与其对应标签蛋白的结合产生HTRF信号。在KRAS G12C/SOS1抑制剂或GTP竞争物存在时，HTRF信号随之降低。

检测方案
本试剂盒可在96孔或384孔低容量白色微孔板（终体积20 µL）中运行。操作流程如下：将化合物或标准品直接分装至检测板中，随后加入预混合的GTP和人源Tag1-KRAS G12C蛋白，以及人源Tag2-SOS1蛋白，接着分装HTRF检测试剂（即铽穴状化合物标记的抗Tag2抗体和XL665标记的抗Tag1抗体）。HTRF荧光基团标记的试剂可预先混合并在单个分装步骤中添加。整个过程无需洗涤步骤。该方案还可通过按比例调整各添加体积，实现进一步的小型化或放大化。

检测验证

KRAS G12C/SOS1抑制剂筛选
将已知作为KRAS或SOS1抑制剂的多种化合物加入检测体系中。BAY-293、BI-3406、BI-2852、MRTX-1257以及两种KRAS G12C选择性化合物ARS-1620和AMG-510，均表现出与文献报道高度吻合的正确效力和药理学排序。ARS-1620和AMG-510的结果证实，KRAS G12C/SOS1结合检测试剂盒对KRAS G12C突变形式具有特异性。

竞争性或非竞争性核苷酸筛选
将两种核苷酸GDP和ATP加入检测体系中。GDP作为一种已知与KRAS G12C结合的GTP竞争物，表现出与文献报道高度吻合的正确效力。而ATP作为一种非GTP竞争性核苷酸，对检测体系无任何影响，从而证实了该试剂盒仅特异性检测GTP竞争物或KRAS G12C/SOS1抑制剂。

技术规格