瑞孚迪均相检测技术: 高灵敏、高效率赋能NF-κB炎症通路研究

当病原体相关分子模式（PAMPs）或损伤相关分子模式（DAMPs）激活Toll样受体（TLR）时，髓样分化因子88（MYD88）作为关键接头蛋白迅速募集，并通过其死亡结构域（DD）与IL-1受体相关激酶4（IRAK4）形成信号复合体。IRAK4通过磷酸化激活IRAK1/2，进而促进TRAF6与IRAK1/2的结合，最终激活TAK1-TAB复合物并导致IKK复合物的磷酸化。

这一"TLR→MYD88→IRAK4→IKK→NF-κB"级联反应是天然免疫应答的核心通路。

在静息状态下，NF-κB与抑制蛋白IκB结合存在于胞质中；当IKK复合物被上游信号（如IRAK4-TRAF6-TAK1轴）激活后，引发IκB蛋白的泛素化降解，释放出的NF-κB二聚体（如p50/p65）随即转入核内，启动炎症因子（IL-6、TNF-α）、趋化因子（IL-8）等靶基因的转录。

这一精密调控机制若发生失衡（如IRAK4功能获得性突变或IκB降解异常），将导致持续性的炎症反应和组织损伤。

图1. TLR/MYD88/IRAK4-NF-κB信号通路关键节点（数据来源：瑞孚迪）

1. 上游激酶调控（TLR/MYD88/IRAK4轴）

IRAK4抑制剂（如PF-06650833）通过阻断IRAK4激酶活性抑制MYD88依赖的信号传导；TAK1抑制剂（如5Z-7-oxozeaenol）靶向IKK上游调控节点；IKKβ选择性抑制剂（如IMD-0354）已进入特应性皮炎II期临床

2. 核转位干预

靶向NF-κB核定位信号（NLS）的小分子（如SN50肽）可阻断p65入核。

3. 下游效应调控

NF-κB激活后驱动多种炎症介质的表达，TNF-α单抗（阿达木单抗）等生物制剂已形成超300亿美元市场规模。

瑞孚迪均相检测技术：

突破传统局限，加速研究进程

针对TLR/MYD88/IRAK4-NF-κB通路的关键节点，瑞孚迪（Revvity）的均相检测系统基于时间分辨荧光（HTRF）和荧光共振能量转移（Alpha）技术，克服了传统检测方法在灵敏度、通量和操作便捷性等方面的局限，为NF-κB通路研究（如IRAK4/IκB激酶活性、IRAK4/IKKα/β/NF-κB p65的磷酸化和细胞因子检测）提供高效、可靠的解决方案：

✅1. 卓越的检测性能

具备飞摩尔级（fM）检测灵敏度和4-5个数量级的宽线性范围，满足不同浓度样本的检测需求。

⏱️2. 高效的工作流程

采用免洗脱均相检测技术，省去繁琐的洗涤步骤，实验流程缩短至2小时，显著提升研究效率。

🔄3. 灵活的应用拓展

支持单孔多重指标同步检测，适用于分子互作、酶活分析和细胞信号传导等多种研究场景。

1. 激酶活性检测

HTRF KinEASE™ STK 检测试剂盒采用通用型底物设计，通过直接检测激酶磷酸化信号（而非间接ADP检测），避免ADP检测法的局限性（如ATP竞争干扰、需额外寻找底物、易受内源性ADP影响等）。经验证可检测IRAK4、IKKα/β等上百种激酶活性，覆盖更广泛的研究需求，并提供更高的灵敏度和准确性。（详情点击：高效检测激酶活性：Revvity HTRF® KinEASE试剂盒——通用型底物兼容200+激酶）

图2. HTRF KinEASE STK检测试剂盒原理

2. 磷酸化蛋白检测

HTRF检测NF-κB p65（Ser536）磷酸化水平，来评价通路的激活状态，避免了WB和流式等方法的操作步骤复杂，实验周期长等问题，且HTRF方法采用双抗夹心法，特异性更强。

图3. HTRF Human and Mouse Phospho-NF-κB (Ser536) 检测原理

3. 细胞因子检测

瑞孚迪细胞因子检测试剂盒具备pg级超高灵敏度，例如AlphaLISA Human IL-6试剂盒可精准检测低至1.3 pg/mL的炎症因子水平，为信号通路活性研究提供关键定量依据。

图4. AlphaLISA Human IL-6 检测原理

结语：未来趋势与挑战

通过对TLR/MYD88/IRAK4-NF-κB通路的精准干预，结合Revvity高灵敏度检测技术，助力研究人员突破传统方法的局限，可实现从基础机制到临床转化的闭环研究。未来，随着技术的持续创新，Revvity将继续为炎症性疾病和肿瘤治疗的突破性进展提供支持，最终造福全球患者。

这一技术突破不仅显著提升研究效率，更为精准医疗时代的NF-κB靶向治疗开辟新路径。Revvity将持续推动技术创新，与全球科研工作者携手，共同推动医学研究的进步。

产品列表

激酶活性检测试剂盒

总/磷酸化蛋白检测试剂盒

细胞因子检测试剂盒