产品概述

环磷酸鸟苷（cGMP）检测试剂盒可准确定量细胞产生的 cGMP，适用于筛选调控磷酸二酯酶（PDE）活性的分子。cGMP 是重要的第二信使，通过激活多种蛋白效应因子介导细胞活动。细胞内 cGMP 由可溶性鸟苷酸环化酶和颗粒型鸟苷酸环化酶合成，分别由一氧化氮（NO）和心房钠尿肽（ANP）结合触发。该试剂盒结合均相 TR-FRET 技术的易用性和高灵敏度，相比传统 ELISA 检测具有显著优势。

工作原理

检测原理

本试剂盒基于竞争结合原理，包含两种关键试剂：一种是标记穴状化合物（Cryptate，供体）的特异性抗体，另一种是偶联 d2（受体）的 cGMP。细胞产生的 cGMP 与 d2 标记的 cGMP 会竞争结合铕穴状化合物（Eu Cryptate）标记的抗 cGMP 单克隆抗体。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-cgmp 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - cGMP 检测原理”）

检测方案

cGMP 检测采用简化流程，仅需两步孵育：

1. 目标化合物对细胞的刺激；
2. 使用 HTRF 试剂进行 cGMP 检测。

细胞刺激后，仅需在室温下进行一次 1 小时孵育即可完成检测。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-cgmp 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - cGMP 检测方案”）

检测详情

核心规格

• 工作范围：0.5–500 nM
• 半数有效浓度（EC50）：21 nM
• 检测限：0.7 nM
• 特异性：cGMP 100%、鸟苷酸（GMP）＜0.003%、二磷酸鸟苷（GDP）＜0.001%、三磷酸鸟苷（GTP）＜0.003%、腺苷酸（AMP）、三磷酸腺苷（ATP）、环磷酸腺苷（cAMP）均为 0.001%

（标注：specifications-cgmp 为图表 / 文件标识，可译为 “cGMP 检测规格”）

检测验证

细胞依赖性 cGMP 产生与 ANP 滴定

cGMP 检测灵敏度高且工作范围广（0.5-500 nM），可灵活调整每孔细胞数量。图 1 显示，每孔 300 个和 20,000 个细胞经 S - 亚硝基 - N - 乙酰青霉胺（SNAP，可溶性鸟苷酸环化酶（GC）直接激活剂）刺激后的检测结果，仅 300 个细胞即可检测到具有统计学意义的 cGMP 量。图 2 为细胞经心房钠尿肽（ANP，颗粒型 GC 直接激活剂）刺激后的典型剂量反应曲线。

• 图 1 实验流程：将 300 至 20,000 个 RFL-6 大鼠肺成纤维细胞接种到 384 孔低体积微孔板中，在有或无 SNAP 的条件下孵育，按标准实验方案使用 HTRF cGMP 试剂盒定量 cGMP。
• 图 2 实验流程：将 10,000 个 RFL-6 大鼠肺成纤维细胞接种到 384 孔低体积微孔板中，用梯度浓度 ANP 刺激，按标准实验方案使用 HTRF cGMP 试剂盒计算 cGMP 水平。

（标注：assay-validation-cgmp 为图表 / 文件标识，可译为 “cGMP 检测验证”）

磷酸二酯酶（PDE）相关检测

PDE 家族底物与主要组织表达

• PDE2：肾上腺皮质、脑、心脏，底物为 cAMP/cGMP
• PDE3：心脏、脂肪组织、胰腺、血小板，底物为 cAMP/cGMP
• PDE4：多种组织，底物为 cAMP
• PDE5：肺、血小板、平滑肌、阴茎海绵体，底物为 cGMP
• PDE6：视杆和视锥光感受器外段，底物为 cGMP
• PDE7：骨骼肌、T 细胞、B 细胞，底物为 cAMP
• PDE8：睾丸、肝脏、甲状腺，底物为 cGMP
• PDE9：肾脏，底物为 cAMP/cGMP
• PDE10：脑，底物为 cAMP/cGMP
• PDE11：骨骼肌、前列腺，底物为 cAMP/cGMP

PDE 抑制剂测试

3 - 异丁基 - 1 - 甲基黄嘌呤（IBMX）是非选择性 PDE 抑制剂，咯利普兰（Rolipram）是 PDE4 选择性抑制剂。实验中 PDE4 浓度为 5 ng/mL，cAMP 底物终浓度为 44 nM。（标注：assay-validation-cgmp 为图表 / 文件标识，可译为 “cGMP 检测验证”）

IW-1973 对 cGMP 和 pVASP Ser239 的剂量反应分析

IW-1973 是可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）刺激剂，其浓度增加会同时促进 cGMP 产生和血管扩张刺激磷蛋白（VASP）磷酸化。两项指标均通过 HTRF 检测技术测定。（数据来源：改编自 Tobin J.V 等人，2018 年《新型可溶性鸟苷酸环化酶刺激剂 IW-1973 的药理学特征：在临床前疾病模型中具有广泛组织分布、抗高血压、抗炎和抗纤维化作用》，《药理学与实验治疗学杂志》365 (3):664-675）（标注：assay-validation-cgmp 为图表 / 文件标识，可译为 “cGMP 检测验证”）

简化通路

一氧化氮（NO）信号通路

一氧化氮是关键效应分子，参与心血管稳态和血管舒张等多种生理过程。血管受到应激时，NO 在局部合成，与周围组织的可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）结合，触发下游钙离子（Ca²⁺）浓度降低和 cGMP 浓度升高，进而改变蛋白激酶 G、环核苷酸门控离子通道和磷酸二酯酶的活性，最终导致附近血管舒张、血流量增加和张力降低。（标注：biomarkers-pathway-cgmp-kit 为图表 / 文件标识，可译为 “生物标志物 - cGMP 试剂盒信号通路”）

产品规格

其他规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：Kit（试剂盒）
• 样本体积：5 µL
• 运输条件：常温运输（Shipped Ambient）
• 靶标类别：Biomarkers（生物标志物）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：Cardiovascular（心血管）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）