产品概述

HTRF 人 MMP9 检测试剂盒旨在测定人源细胞培养上清液中基质金属蛋白酶 9（MMP9，包含前体形式与活性形式）的浓度。基质金属蛋白酶 9（MMP9），又称明胶酶 B，是一种锌依赖性内肽酶，以无活性的酶原形式分泌，随后通过蛋白水解切割被激活。MMP9 通过降解细胞外基质（ECM）的结构成分（如胶原蛋白、明胶和弹性蛋白），在组织修复和重塑中发挥重要作用。此外，这种内肽酶还可通过加工多种非细胞外基质分子（如细胞因子和趋化因子，例如前体转化生长因子 -β、前体肿瘤坏死因子 -α、趋化因子 CXCL1、CXCL8、干扰素 -β），在细胞生长、迁移、炎症反应和血管生成中承担关键功能。其酶活性受生理抑制剂 —— 金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP1 和 TIMP2）的调控，这些抑制剂可阻止底物与酶的催化结构域结合。MMP9 的表达主要在转录水平受多种生长因子、细胞因子及细菌产物（包括脂多糖，LPS）调控。MMP9 表达上调会导致其与 TIMP1/2 失衡，这与组织纤维化、癌症、糖尿病、关节炎和心血管疾病相关。因此，在研究此类疾病及研发新药物时，该生物标志物的分泌水平是常用的检测终点。

工作原理

检测原理

Cisbio 人 MMP9 检测试剂盒基于时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）夹心免疫分析技术，涉及两种特异性抗人 MMP9 抗体：一种标记铕（Eu³⁺）穴状化合物（供体），另一种标记 d2（受体）。两种抗体均能与人 MMP9 结合，供体与受体的近距离接触会产生荧光 TR-FRET 信号。信号强度与人 MMP9 在样本中的浓度呈正比。（标注：human-mmp9-kit 为图表标识，对应 “人 MMP9 试剂盒”）

检测流程

Cisbio 人 MMP9 检测可在 96 孔或 384 孔低体积白色检测板中进行（最终体积 20 微升）。具体操作如下：将细胞样本或标准品直接加入检测板，使用 HTRF® 试剂检测人 MMP9。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，无需洗涤步骤。只需按比例调整各试剂的添加体积，即可进一步缩小检测规模或扩大检测量。该检测可用于冷冻或新鲜制备的细胞样本，且大多数时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）多功能读板仪均可记录 HTRF 信号。（标注：human-mmp9-kit 为图表标识，对应 “人 MMP9 试剂盒”）

检测验证

脂多糖（LPS）和佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）诱导人肝星状细胞系 LX-2 中 MMP9 表达上调

将人肝星状细胞系 LX-2 * 接种于 96 孔板（50,000 个细胞 / 孔），使用完全培养基培养。次日，用 100 微升不同剂量的脂多糖（LPS）或佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）（溶于含 0.2% 牛血清白蛋白的无胎牛血清培养基中）处理细胞 24 小时。收集细胞上清液，定量检测分泌型 MMP9 的水平。结果与文献数据一致：脂多糖（LPS）处理可使人 MMP9 分泌量呈剂量依赖性增加；佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）处理细胞 24 小时可诱导人 MMP9 分泌水平上调。* 该细胞系由 EMD Millipore 公司提供（产品编号 #SCC064）（标注：human-mmp9-kit 为图表标识，对应 “人 MMP9 试剂盒”）（标注：human-mmp9-kit 为图表标识，对应 “人 MMP9 试剂盒”）

佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）和活性氧（ROS）诱导人乳腺癌细胞系 MCF-7 中 MMP9 表达上调

将人乳腺癌细胞系 MCF-7 接种于 96 孔板，使用完全培养基培养。次日，用 50 微升不同剂量的佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）或过氧化氢（H₂O₂）（溶于含 0.5% 牛血清白蛋白的无胎牛血清培养基中）处理细胞 24 小时。收集细胞上清液，定量检测分泌型 MMP9 的水平。结果符合预期：细胞暴露于佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）或过氧化氢（H₂O₂）24 小时，可使人 MMP9 分泌量呈剂量依赖性增加。（标注：human-mmp9-kit 为图表标识，对应 “人 MMP9 试剂盒”）（标注：human-mmp9-kit 为图表标识，对应 “人 MMP9 试剂盒”）

HTRF 人 MMP9 检测试剂盒与商用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测的相关性

对经佛波醇肉豆蔻酸乙酸酯（PMA）处理 24 小时（在含 0.2% 牛血清白蛋白的无胎牛血清培养基中）的 LX-2 * 细胞上清液，采用 HTRF 人 MMP9 检测试剂盒与商用酶联免疫吸附试验（ELISA）进行平行对比检测。结果显示，两种检测方法的相关性极佳，相关系数（r）接近 1。* 该细胞系由 EMD Millipore 公司提供（产品编号 #SCC064）（标注：human-mmp9-kit 为图表标识，对应 “人 MMP9 试剂盒”）

产品规格

• 应用领域：蛋白定量（Protein Quantification）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样本体积：16 微升（µL）
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种：人（Human）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：心血管疾病（Cardiovascular）、代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化（NASH/Fibrosis）、肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）