产品概述

TDP-43（TAR DNA 结合蛋白 43）是一种参与 RNA 相关代谢的核酸结合蛋白。聚集态 TDP-43 已被确定为肌萎缩侧索硬化症（ALS）和额颞叶变性（FTLD）的标志性特征，更广泛存在于多种神经退行性疾病（即 TDP-43 蛋白病）中。在病理状态下（突变或失调），TDP-43 会在脑和脊髓神经元的细胞质中形成不溶性包涵体。该 TDP-43 聚集检测试剂盒可在细胞模型中快速检测人和小鼠的 TDP-43 聚集体。

工作原理

TDP-43 聚集检测原理

TDP-43 聚集体的检测基于两种 HTRF 特异性信号的对比：对照条件下仅检测可溶性 TDP-43，解聚条件下评估总解聚态与可溶性 TDP-43。解聚态 HTRF 信号的增强反映 TDP-43 的聚集水平。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-principle-tdp43-62tdp43peg 为图表标识，对应 “TDP-43 聚集检测原理”）

TDP-43 解聚步骤

含 TDP-43 聚集体的样本需经过解聚步骤，以计算样本处理前后（前 / 后）的 TDP-43 聚集水平（样本解聚可遵循右侧描述的方案）。试剂盒中提供该步骤所需试剂，方便使用。样本直接加入检测板（白色低体积板），使用 HTRF® 试剂进行检测。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-disaggregation-tdp43 为图表标识，对应 “TDP-43 解聚步骤”）

TDP-43 聚集检测流程

经解聚步骤处理或未处理的同一对照条件样本，直接加入检测板中，使用 HTRF® 试剂进行检测（采用 384 孔低体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板，终体积 20 µL）。标记有 HTRF 供体和受体的抗体已预先混合，可通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。通过按比例调整各试剂的添加体积，该检测可适配最高 1536 孔板的检测格式。（标注：biomarkers-how-it-works-assay-protocol-tdp43 为图表标识，对应 “TDP-43 聚集检测流程”）

TDP-43 聚集检测数据分析

每个样本的聚集比率反映样本中 TDP-43 聚集体的存在情况：无不可溶性聚集体时，聚集比率约为 1 或以下。（标注：biomarkers-how-it-works-tdp-43-aggregation-1 为图表标识，对应 “TDP-43 聚集数据分析”）

检测验证

小鼠 Neuro2a 细胞系和人 HeLa 细胞系上的 TDP-43 聚集试剂盒验证

将人 HeLa 细胞以 25,000 和 50,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时；小鼠 Neuro2a 细胞以 50,000 和 100,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板，同样条件下孵育 24 小时。HeLa 细胞用 1 µM 星形孢菌素（一种已明确的半胱天冬酶激活剂，可切割 TDP-43 并诱导 C 端片段聚集）刺激 6 小时，Neuro2a 细胞用 2 µM 星形孢菌素刺激 6 小时，另设未刺激组。刺激后移除细胞培养基，加入 50 µL 补充型裂解缓冲液 #1（1X），在室温下温和振荡裂解 30 分钟。将相同条件的 3 个孔样本合并，HeLa 细胞取 2×60 µL 纯裂解液，Neuro2a 细胞取 2×60 µL 稀释裂解液（用补充型裂解缓冲液按 1:4 稀释），转移至 96 孔板，随后进行解聚或对照检测步骤：加入 10 µL 解聚缓冲液 A 或对照检测缓冲液 C，室温孵育 15 分钟；再加入 10 µL 解聚缓冲液 B 或对照检测缓冲液 C。处理后，取 16 µL 各样本（解聚组或对照检测组）转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF TDP-43 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。结果符合预期：星形孢菌素处理组的 TDP-43 聚集体检测信号增强，未刺激组的聚集比率约为 1 或以下。该结果不仅证明试剂盒适用于人和小鼠样本，还提示不同细胞背景下 TDP-43 的聚集水平存在差异。（标注：assay-validation-tdp-43-aggregation-1、assay-validation-tdp-43-aggregation-2 为图表标识，对应 “细胞系验证结果”）

过表达野生型（WT）和突变型 TDP-43 的 HeLa 细胞模型中 TDP-43 聚集体的检测

将人 HeLa 细胞（100,000 个细胞 / 孔）接种于 96 孔板，使用 Lipofectamine 2000 转染 200 ng / 孔的 GFP-TDP-43 野生型（全长）或 GFP-TDP-43 突变型（C 端片段 220-414 位氨基酸）质粒。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 48 小时后，用 1 µM 星形孢菌素刺激 6 小时，另设未刺激组。移除细胞培养基，加入 50 µL 补充型裂解缓冲液 #1（1X），室温温和振荡裂解 30 分钟。将相同条件的 3 个孔样本合并，取 2×60 µL 稀释裂解液（用补充型裂解缓冲液按 1:4 稀释）转移至 96 孔板，随后进行解聚或对照检测步骤：加入 10 µL 解聚缓冲液 A 或对照检测缓冲液 C，室温孵育 15 分钟；再加入 10 µL 解聚缓冲液 B 或对照检测缓冲液 C。处理后，取 16 µL 各样本（解聚组或对照检测组）转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF TDP-43 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。结果符合预期：与未转染细胞相比，单独过表达野生型或突变型 TDP-43 均会提高聚集比率；星形孢菌素处理可进一步增加 TDP-43 聚集比率，且对过表达突变型 TDP-43 的细胞效果更显著。（标注：assay-validation-tdp-43-aggregation-3 为图表标识，对应 “过表达细胞模型验证结果”）

HTRF TDP-43 聚集检测与 Western Blot 的对比

将人 HeLa 细胞在 T175 培养瓶中用完全培养基培养 3 天，直至达到 80% 汇合度（37°C、5% CO₂）。用 1 µM 星形孢菌素刺激细胞 6 小时后，用补充型裂解缓冲液裂解。将细胞裂解液用补充型裂解缓冲液进行系列稀释，每个稀释度分别进行解聚或对照处理：取 60 µL 样本，加入 10 µL 解聚缓冲液 A 或对照检测缓冲液 C，室温孵育 15 分钟；再加入 10 µL 解聚缓冲液 B 或对照检测缓冲液 C。取 16 µL 各稀释样本（解聚组或对照检测组）转移至低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF TDP-43 检测试剂，过夜孵育后记录 HTRF 信号。同时取等量未解聚的裂解液，与 Western Blot 进行平行对比。结果显示：Western Blot 检测到星形孢菌素处理诱导产生的 C 端片段（35 kDa），该片段不溶性且形成聚集体（数据未展示）；在该实验条件下，HTRF TDP-43 聚集检测的灵敏度至少是 Western Blot 的 2 倍。（标注：assay-validation-tdp-43-aggregation-4 为图表标识，对应 “HTRF 与 Western Blot 对比结果”）

简化通路

TDP-43 聚集检测简化通路

TDP-43（TAR DNA 结合蛋白 43）是一种 DNA 和 RNA 结合蛋白，在 RNA 代谢中起关键作用，主要定位于细胞核，可在细胞核与细胞质间穿梭。在应激或突变等病理条件下，TDP-43 会在细胞质中异常定位，并可能被切割为 C 端片段，进而导致泛素化和过度磷酸化的毒性聚集体积累，最终形成不溶性包涵体。异常定位的可溶性 TDP-43 会被泛素化，随后通过蛋白酶体降解；而自噬系统会在可能的情况下尝试清除不溶性聚集体。TDP-43 聚集体在细胞水平上参与多种维持 RNA 代谢和细胞稳态的机制（如蛋白酶体活性、自噬、线粒体毒性等）。在肌萎缩侧索硬化症（ALS）、额颞叶痴呆（FTD）或阿尔茨海默病等神经退行性疾病中均发现 TDP-43 包涵体的存在，这表明 TDP-43 在神经退行性病变过程中起重要作用，并为治疗学研究开辟了新方向。（标注：biomarkers-tab4-tdp43-simplified-pathway-62tdp43peg 为图表标识，对应 “TDP-43 聚集简化通路”）

产品规格

• 应用领域：蛋白定量（Protein Quantification）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：生物标志物（Biomarkers）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：神经科学（Neuroscience）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）