概述

α- 微管蛋白（Alpha-Tubulin）是微管蛋白超家族（tubulin protein superfamily）的成员之一，可与 β- 微管蛋白（beta tubulin）聚合形成微管（microtubules）—— 真核生物细胞骨架（eukaryotic cytoskeleton）的主要组成部分。微管参与多种细胞过程，例如结构支撑、细胞内运输（intracellular transport）和 DNA 分离（DNA segregation）。研究表明，α- 微管蛋白第 40 位赖氨酸（K40）的乙酰化修饰（Alpha-Tubulin K40 acetylation）会影响微管蛋白的自组装（tubulin self-assembly）过程，并保护微管免受应激诱导的材料疲劳（stress-induced material fatigue）损伤。α- 微管蛋白乙酰化（K40）检测试剂盒（Alpha-Tubulin acetyl-K40 kit）专为定量检测细胞裂解液（cell lysates）中第 40 位赖氨酸乙酰化修饰的 α- 微管蛋白（K40 acetylated Alpha-Tubulin）而设计。

工作原理

检测原理

α- 微管蛋白乙酰化（K40）的检测采用双抗夹心免疫分析法（sandwich immunoassay），该方法使用两种特异性抗 α- 微管蛋白抗体（specific anti-alpha-Tubulin antibodies），分别标记有铕 - 穴状化合物（Europium Cryptate，供体）和 d2（受体）。检测信号强度与样本中第 40 位赖氨酸乙酰化修饰的 α- 微管蛋白浓度呈正比。（图示：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-alpha-tubullin-63adk072peg-63adk072peh.svg，α- 微管蛋白乙酰化（K40）检测原理相关图示）

检测方案

以下为 α- 微管蛋白乙酰化（K40）检测的具体方案：将细胞接种（plated）到 96 孔培养板（96-well culture plate）中，在同一培养板内完成刺激（stimulated）与裂解（lysed）操作；随后将裂解液转移至检测板（assay plate）中，使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂进行 α- 微管蛋白（乙酰化 K40）检测。该方案可对细胞活力（viability）与融合度（confluence）进行监测。标记有 HTRF 荧光团（HTRF fluorophores）的抗体可预先混合，并通过单次加样（single dispensing step）步骤加入，以进一步简化检测流程。只需按比例调整各试剂的加样体积，该检测即可在 96 孔板至 384 孔板中进行。（图示：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg，α- 微管蛋白乙酰化（K40）检测方案相关图示）

检测验证

曲古抑菌素 A（TSA）与 Tubacin 对 NIH 3T3 细胞的作用（检测）

将 12500 个 NIH/3T3 细胞接种到 96 孔板中，培养过夜后，在 37°C、含二氧化碳（CO₂）的环境中加入化合物处理 16 小时。移除上清液（supernatant）后加入裂解缓冲液（lysis buffer），在振荡条件下反应 30 分钟以制备细胞裂解液，随后将裂解液转移至 384 孔板中进行检测。结果显示，组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase）强效抑制剂曲古抑菌素 A（TSA，Trichostatin A），以及组蛋白去乙酰化酶 6（HDAC6）选择性抑制剂 Tubacin，均可提高 NIH/3T3 细胞中第 40 位赖氨酸乙酰化修饰的 α- 微管蛋白水平。（图示：3assay-validation-tubulin-63adk072peg.svg，曲古抑菌素 A 与 Tubacin 对 NIH 3T3 细胞中 α- 微管蛋白乙酰化（K40）水平影响的检测相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 分子修饰（Molecular Modification）：乙酰化（Acetylation）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
• 单位规格（Unit Size）：10000 个检测点（10,000 assay points）