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α- 微管蛋白(Alpha-Tubulin)是微管蛋白超家族成员,与 β- 微管蛋白聚合形成微管 —— 真核细胞骨架的主要组成部分。微管参与多种细胞过程,如结构支撑、细胞内运输和 DNA 分离。该 α- 微管蛋白试剂盒专为定量检测细胞裂解液中的总 α- 微管蛋白设计,可作为实验中的归一化读数工具。
总 α- 微管蛋白的检测采用夹心免疫分析技术,涉及两种特异性抗 α- 微管蛋白抗体:一种标记铕穴状化合物(Europium Cryptate,供体),另一种标记 d2(受体)。信号强度与样本中总 α- 微管蛋白的浓度呈正比。(标注:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-alpha-tubullin-63adk073peg-63adk073peh.svg 为图表标识,对应 “总 α- 微管蛋白检测原理”)
总 α- 微管蛋白检测采用双板实验方案:细胞在同一 96 孔培养板中接种、刺激并裂解,随后将裂解液转移至检测板,使用 HTRF 试剂检测总 α- 微管蛋白。该方案可监测细胞活力与汇合度。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合,单次加样简化流程,按比例调整试剂体积即可适配 96 孔至 384 孔板格式。(标注:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk073peg-63adk073peh.svg 为图表标识,对应 “总 α- 微管蛋白检测流程”)
将 12,500 个 NIH/3T3 细胞接种于 96 孔板,过夜孵育后,用相关化合物在 37°C、CO₂环境下处理 16 小时。移除上清液后加入裂解缓冲液,振荡 30 分钟制备裂解液,随后将裂解液转移至 384 孔板进行检测。结果显示,组蛋白去乙酰化酶强效抑制剂曲古抑菌素 A(TSA)和 HDAC6 选择性抑制剂 Tubacin,可提高 NIH/3T3 细胞中 α- 微管蛋白 K40 位的乙酰化水平,但两种抑制剂处理后,α- 微管蛋白的总表达水平保持稳定。(标注:3assay-validation-total-tubulin-63adk073peg.svg 为图表标识,对应 “总 α- 微管蛋白检测验证结果”)