概述

肌球蛋白（Myosins）是一类基于肌动蛋白的马达蛋白，能够参与真核细胞收缩力的产生。每个肌肉肌球蛋白组装体包含一对肌球蛋白重链（MYH，Myosin Heavy Chain）和两对肌球蛋白轻链（MYL，Myosin Light Chain）。肌球蛋白重链 2（MyHC-2）属于 II 类（或常规型）肌球蛋白重链家族成员，在骨骼肌收缩过程中发挥作用。本检测方法可用于检测细胞裂解液中的肌球蛋白重链，适用于骨骼肌疾病相关的研究。

工作原理

检测原理

肌球蛋白重链的检测采用双抗夹心免疫分析法，该方法使用两种特异性抗肌球蛋白重链抗体，分别标记有铕穴状化合物（供体，Europium Cryptate）和 d2（受体）。检测信号的强度与样本中肌球蛋白重链的浓度呈正比。（图示：2biomarkers-how-it-works-assay-principle-myosin-heavy-chain-63adk098peg-63adk098peh-63adk098pej.svg，肌球蛋白重链检测原理相关图示）

检测方案

以下为肌球蛋白重链检测的具体方案：细胞在同一 96 孔培养板中完成铺板、刺激处理与裂解操作；随后将裂解液转移至检测板中，进行肌球蛋白重链的检测。该方案可对细胞活力与融合度进行监测。标记有均相时间分辨荧光（HTRF）荧光团的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程。只需按比例调整各试剂的添加体积，该检测即可在 96 孔板至 384 孔板中开展。（注：原文中 “Two-plate protocol of the HTRF total BRD2 assay”（HTRF 总 BRD2 检测双板方案）与本部分 “肌球蛋白重链检测方案” 主题无关，推测为文本错植，故未纳入翻译）

检测验证

C2C12 细胞中肌球蛋白重链的检测

为诱导 C2C12 成肌细胞分化为肌管，将 C2C12 细胞置于含有不同百分比胎牛血清（FBS，Fetal Bovine Serum）或马血清（FS，Horse Serum）的培养基中培养。培养 4 天或 8 天后，吸弃培养基，加入 1× 裂解缓冲液，在室温（RT，Room Temperature）下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。取 16 微升（µL）裂解液转移至 384 孔白色浅孔（sv，Shallow Volume）微孔板中，再加入 4 微升肌球蛋白重链检测试剂。在室温下孵育过夜后，记录均相时间分辨荧光（HTRF）信号。（图示：3assay-validation-myosin-heavy-chain-1.svg，C2C12 细胞中肌球蛋白重链检测相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术，Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：心血管领域（Cardiovascular）、罕见病（Rare Diseases）
• 单位规格（Unit Size）：10000 个检测点（10,000 assay points）