品牌: Revvity
该试剂盒用于快速检测细胞上清液和完整细胞中的髓系细胞触发受体 2(TREM-2)。TREM 受体家族可调控免疫系统多种细胞活性,包括中性粒细胞、单核细胞 / 巨噬细胞、小胶质细胞及树突状细胞。可溶性 TREM-2 可在人脑脊液中检测到,多发性硬化症及其他炎症性神经系统疾病患者体内的可溶性 TREM-2 水平,高于无炎症性神经系统疾病患者。
人 TREM-2 检测采用夹心免疫分析技术,涉及两种特异性抗人 TREM-2 抗体:一种标记铕穴状化合物(Europium Cryptate,供体),另一种标记 d2(受体)。信号强度与样本中 TREM-2 的浓度呈正比。(标注:1biomarkers-how-it-works-assay-principle-myosin-heavy-chain-63adk098peg-63adk098peh-63adk098pej.svg 为图表标识,对应 “人 TREM-2 检测原理”)
TREM-2 检测流程简便,采用 384 孔小体积白色检测板(终体积 20 µL),将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板即可检测人 TREM-2。标记 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合,单次加样简化操作流程,按比例调整试剂体积即可适配 96 孔至 384 孔板格式。(标注:2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-human-trem-2-63adk099peg-63adk099peh-63adk099pej.svg 为图表标识,对应 “人 TREM-2 检测流程”)
加入 100 nM PMA 诱导 THP-1 细胞分化,使其贴壁生长,每孔终体积 200 µL,37°C 条件下刺激 72 小时。收集分化组与未分化组细胞上清液进行检测,评估多种细胞密度以确保浓度插值准确。结果显示,PMA 诱导分化的 THP-1 细胞中 TREM-2 受体表达水平更高。(标注:3assay-validation-trem2-1.svg 为图表标识,对应 “THP-1 细胞上清液检测结果”)
将三种不同密度的 THP-1 细胞接种于 96 孔板,加入 100 nM PMA 诱导分化使其贴壁,每孔终体积 200 µL,37°C 条件下刺激 72 小时。收集细胞上清液定量检测可溶性 TREM-2,贴壁细胞用完全细胞培养基洗涤 3 次后收集上清液检测,最后将细胞 37°C 孵育 24 小时,收集样本再次检测。每个样本评估多种稀释度以确保浓度插值准确。结果显示,PMA 诱导 THP-1 细胞分化后,TREM-2 受体高表达且发生切割;洗涤处理可去除残留可溶性 TREM-2,额外孵育 24 小时可检测到新释放的可溶性 TREM-2。(标注:4assay-validation-trem2-2.svg 为图表标识,对应 “洗涤处理后可溶性 TREM-2 检测结果”)
TREM-2 即髓系细胞触发受体 2,TREM 受体家族可调控免疫系统多种细胞活性,包括中性粒细胞、单核细胞 / 巨噬细胞、小胶质细胞及树突状细胞。TREM-2 需衔接蛋白 DAP12 介导下游信号传导,其胞外部分可被切割产生可溶性 TREM-2,且可在人脑脊液中检测到。多发性硬化症及其他炎症性神经系统疾病患者体内的可溶性 TREM-2 水平,高于无炎症性神经系统疾病患者。(标注:5biomarkers-tab4-trem2-simplified-pathway-63adk099peg-63adk099peh-63adk099pey.svg 为图表标识,对应 “人 TREM-2 简化通路”)