概述

穿孔素（Perforin，又称细胞溶素（Cytolysin）或淋巴细胞成孔蛋白（Lymphocyte pore-forming protein））存在于细胞毒性淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK 细胞，natural killer cells）和细胞毒性 T 细胞中。穿孔素可在细胞膜上形成孔道，使颗粒酶 B（Granzyme B）进入靶细胞胞质，并通过激活胱天蛋白酶（caspase）触发细胞凋亡（apoptosis）。本试剂盒旨在快速检测细胞上清液和完整细胞中的人源穿孔素，且该检测方法无需任何洗涤步骤即可实现高通量检测，因此相较于酶联免疫吸附试验（ELISA）更节省时间。

工作原理

检测原理

人源穿孔素的检测采用双抗夹心免疫分析法，该方法使用两种特异性抗人源穿孔素抗体，分别标记有铕 - 穴状化合物（供体，Europium Cryptate）和 d2（受体）。检测信号的强度与样本中穿孔素的浓度呈正比。（图示：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-perforin-63adk100peg-63adk100peh-63adk100pej.svg，穿孔素检测原理相关图示）

检测方案

右侧介绍了检测方案，该方案使用 384 孔小体积白色微孔板或 Revvity 品牌低体积 96 孔板（最终反应体积为 20 微升）。取 16 微升细胞上清液、样本或标准品直接加至检测板中，使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂进行检测。标记有 HTRF 供体和受体的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，以进一步简化检测流程。只需按比例调整各试剂的加样体积，该检测即可在 96 孔板至 384 孔板中进行。（图示：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-perforin-63adk100peg-63adk100peh-63adk100pej.svg，穿孔素检测方案相关图示）

分析性能

• 样本量（Sample size）：16 微升（µL）
• 检测限与定量限（稀释液中）（LOD & LOQ (in diluent)）：0.1 纳克 / 毫升（ng/mL）和 0.25 纳克 / 毫升（ng/mL）（注：LOD 为 Limit of Detection，检测限；LOQ 为 Limit of Quantitation，定量限）
• 检测范围（Assay range）：0.25–100 纳克 / 毫升（ng/mL）
• 出结果时间（Time to result）：室温（RT，Room Temperature）下过夜（ON，Overnight）

（图示：3assay-validation-human-perforin-std-curve.svg，人源穿孔素标准曲线验证相关图示）

检测验证

细胞上清液中穿孔素的检测（双板方案）

将不同细胞密度的 TALL-104 细胞（效应细胞，Effector cells）以悬浮状态接种到 96 孔板中，每孔体积为 50 微升。将 TALL-104 细胞在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下培养 24 小时。培养结束后，取 16 微升细胞上清液转移至 384 孔白色浅孔（sv，Shallow Volume）微孔板中，再加入 4 微升 HTRF 穿孔素和颗粒酶 B 检测试剂。在室温下孵育过夜后，记录 HTRF 信号。（图示：4assay-validation-human-perforin-1-1.svg，细胞上清液中穿孔素检测验证相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种（Target Species）：人（Human）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术，Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
• 单位规格（Unit Size）：500 个检测点（500 assay points）