概述

抗肌萎缩蛋白相关蛋白（Utrophin）是一种常染色体编码的 376 千道尔顿（kDa）细胞骨架蛋白，其结构与功能均与肌营养不良蛋白（dystrophin）相似。它是一种广泛表达的蛋白质，核心作用是将细胞骨架锚定到质膜（plasma membrane）上。Utrophin 在发育中的肌肉中高表达，且在成熟肌肉的神经肌肉接头（neuromuscular junction）处富集。杜氏肌营养不良症（Duchenne's muscular dystrophy）患者体内缺乏肌营养不良蛋白，因此 Utrophin 会发生上调，并重新分布到肌营养不良蛋白通常占据的位置。HTRF Utrophin 检测试剂盒（HTRF Utrophin kit）专为快速检测细胞裂解液中的 Utrophin 而设计。

工作原理

检测原理

Utrophin 的检测采用双抗夹心免疫分析法（sandwich immunoassay），该方法使用两种特异性抗 Utrophin 抗体，分别标记有铕 - 穴状化合物（供体，Europium Cryptate）和 d2（受体）。检测信号的强度与样本中 Utrophin 的浓度呈正比。（图示：1biomarkers-how-it-works-assay-principle-utrophin-63adk107peg-63adk107peh.svg，Utrophin 检测原理相关图示）

检测方案

Utrophin 检测采用双板实验方案，具体步骤如下：

1. 细胞铺板、刺激处理与裂解均在同一培养板中完成，无需更换容器。
2. 将裂解液转移至检测板中，进行 Utrophin 的检测。
3. 该方案可实时监测细胞活力（viability）与融合度（confluence），确保样本质量。
4. 标记有均相时间分辨荧光（HTRF）荧光团的抗体可预先混合，通过单次加样步骤加入，进一步简化检测流程，减少操作误差。
5. 只需按比例调整各试剂的添加体积，该检测即可在 96 孔板至 384 孔板中开展，适配不同通量需求。

（注：原文中检测方案图示编号为 “2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg”，标注为 α- 微管蛋白检测方案，推测为文本错植，此处保留图示编号并明确对应 Utrophin 检测方案）（图示：2biomarkers-how-it-works-assay-protocol-alpha-tubulin-63adk072peg-63adk072peh.svg，Utrophin 检测方案相关图示）

检测验证

HeLa 细胞中 Utrophin 的内源性水平检测

1. 细胞处理：将人源 HeLa 细胞以不同密度（100K、50K、25K、12.5K、6.25K、3.1K 个细胞 / 孔）接种到 96 孔板中，每孔加入 100 微升（µL）完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育。
2. 裂解操作：次日移除培养基，加入 50 微升 3 号裂解缓冲液（lysis buffer #3），在室温下轻轻振荡 30 分钟，确保细胞充分裂解。
3. 检测步骤：取 16 微升裂解液转移至低体积白色微孔板中，随后加入 4 微升预混合的 HTRF Utrophin 检测试剂。
4. 信号记录：室温孵育过夜后，记录 HTRF 信号，分析 HeLa 细胞中 Utrophin 的内源性表达水平。

（图示：2assay-validation-utrophin-1.svg，HeLa 细胞中 Utrophin 内源性水平检测相关图示）

C2C12 细胞中 Utrophin 的内源性水平检测

1. 细胞处理：将小鼠源 C2C12 细胞以不同密度（200K、100K、50K、25K、12.5K、6.25K 个细胞 / 孔）接种到 96 孔板中，每孔加入 100 微升完全培养基，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育。
2. 裂解操作：次日移除培养基，加入 50 微升 3 号裂解缓冲液（lysis buffer #3），在室温下轻轻振荡 30 分钟，确保细胞充分裂解。
3. 检测步骤：取 16 微升裂解液转移至低体积白色微孔板中，随后加入 4 微升预混合的 HTRF Utrophin 检测试剂。
4. 信号记录：室温孵育过夜后，记录 HTRF 信号，分析 C2C12 细胞中 Utrophin 的内源性表达水平。

（图示：3assay-validation-utrophin-2.svg，C2C12 细胞中 Utrophin 内源性水平检测相关图示）

规格参数

其他规格

• 应用领域（Application）：蛋白质定量（Protein Quantification）
• 品牌（Brand）：HTRF
• 检测方式（Detection Modality）：HTRF（均相时间分辨荧光技术）
• 产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
• 样本体积（Sample Volume）：16 微升（16 µL）
• 运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别（Target Class）：生物标志物（Biomarkers）
• 技术平台（Technology）：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移技术）
• 治疗领域（Therapeutic Area）：罕见病（Rare Diseases）
• 单位规格（Unit Size）：10000 个检测点（10,000 assay points）